close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

16745

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2013.02.28
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 16745
(13) C1
(19)
C 12N 5/07
(2010.01)
СПОСОБ ЗАЩИТЫ КЛЕТОК ПЕРВИЧНЫХ ИЛИ ПЕРЕВИВАЕМЫХ
КУЛЬТУР НЕРВНОЙ ТКАНИ ОТ ОСМОТИЧЕСКОГО ОТЕКА
(21) Номер заявки: a 20091250
(22) 2009.08.20
(43) 2011.04.30
(71) Заявитель: Государственное научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии наук
Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Жук Ольга Николаевна;
Никандров Виталий Николаевич;
Гронская Раиса Ивановна; Полукошко Елена Федоровна (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
научное учреждение "Институт физиологии Национальной академии
наук Беларуси" (BY)
(56) НИКАНДРОВ В.Н. и др. Биомедицинская химия, 2008. Т. 54. Вып. 2. С. 192-200.
РОМАНОВСКАЯ А. и др. Наука и инновации. - 2007. - № 3. - С. 24-27.
Руководство по культивированию нервной ткани. - М.: Наука, 1988. - С. 3742.
BY 16745 C1 2013.02.28
(57)
Способ защиты клеток первичных или перевиваемых культур нервной ткани от осмотического отека при инкубировании в течение 1,5 ч в гипотонической среде, представляющей собой синтетическую питательную среду DMEM, разведенную до содержания в ней
NaCl 0,45 %, в атмосфере с 5 %-ным содержанием CO2 и 90 %-ной влажностью при температуре 37 °С, заключающийся в том, что в гипотоническую среду добавляют плазминоген до концентрации 10-7-10-5 М.
Изобретение относится к медицине и биологии, в частности к культивированию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани.
Заявителю неизвестен наиболее близкий аналог, касающийся способа осуществления
защиты культивируемых клеток от осмотического отека, развивающегося при содержании
их в гипотонической питательной среде.
Задачей заявляемого изобретения является создание способа защиты клеток первичных и перевиваемых культур нервной ткани от осмотического отека при содержании их в
гипотонической питательной среде.
Поставленная задача достигается тем, что предложен способ защиты клеток первичных или перевиваемых культур нервной ткани от осмотического отека при инкубировании в течение 1,5 ч в гипотонической среде, представляющей собой синтетическую
питательную среду DMEM, разведенную до содержания в ней NaCl 0,45 %, в атмосфере с
5 %-ным содержанием СO2 и 90 %-ной влажностью при температуре 37 °С, заключающийся в том, что в гипотоническую среду добавляют плазминоген в концентрации 10-710-5 М.
Плазминоген представляет собой гликопротеин молекулярной массой 85 кДа. Наиболее известна его функция в процессе фибринолиза. Плазминоген также обнаружен в нерв-
BY 16745 C1 2013.02.28
ной ткани, где показан его синтез клетками микроглии [1]. Введение его в питательную
среду позволяет ускорить формирование зоны роста органотипической культуры нервной
ткани [2].
Введение плазминогена в концентрации (10-7-10-5 М) позволяет осуществить протекцию первичных и перевиваемых культур клеток нервной ткани от осмотического отека,
развивающегося при содержании их в гипотонической питательной среде.
Пример 1.
Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома С6) плотностью 2,03,0×104 клеток/см2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной среде DMEM, разведенной до содержания в ней NaCl 0,45 %, с добавлением плазминогена в концентрации 10-6 М в атмосфере с 5 %-ным содержанием СO2 и
90 %-ной влажностью при температуре 37 °С. В качестве контроля используют культуры,
которые выращивают в синтетической питательной среде DMEM, разведенной до содержания в ней NaCl 0,45 %.
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 1,5 ч культивирования. Измеряют наибольший и наименьший
диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток [3].
При содержании исследуемых клеток в гипотонической (0,45 % NaCl) синтетической
питательной среде 50 % клеток погибают, а в оставшихся развивается гидратация (отек).
Клетки набухают - объем клеток увеличивается на 33 % (контроль).
При внесении в питательную среду плазминогена (10-6 М) гибель клеток составляет
около 20 %, объем клеток увеличен на 14 % (опыт).
Пример 2.
Первичная культура клеток нервной ткани.
Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы и подвергают механическому
и ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, полученную суспензию с
плотностью 2,0-3,0×104 клеток/см2 высевают на пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной среде DMEM, разведенной до содержания в ней NaCl
0,45 %, с добавлением плазминогена в концентрации 10-6 М в атмосфере с 5 %-ным содержанием CO2 и 90 %-ной влажностью при температуре 37 °С. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в синтетической питательной среде DMEM,
разведенной до содержания в ней NaCl 0,45 %.
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 1,5 ч культивирования. Измеряют наибольший и наименьший
диаметры клеток для определения их объема и учитывают количество клеток [2].
При содержании исследуемых клеток в гипотонической (0,45 % NaCl) синтетической
питательной среде DMEM погибает 47 % клеток, а в оставшихся развивается отек (гидратация). Клетки набухают - объем клеток увеличен на 23 % (контроль).
При внесении в питательную среду плазминогена (10-6 М) погибает 14 % клеток, объем оставшихся клеток увеличен на 12 % (опыт).
Таким образом, достигаемый технический результат заключается в том, что способ
позволяет осуществлять протекцию первичных и перевиваемых культур клеток нервной
ткани от осмотического отека, развивающегося при содержании их в гипотонической питательной среде. Данный способ может найти широкое применение в экспериментальной
биологии и медицине.
Пример 3.
Суспензию перевиваемых линий клеток нервной ткани (глиома C6), выращенную на
синтетической питательной среде DMEM, высевают плотностью 2,0-3,0×104 клеток/см2 на
пластиковые чашки Петри и культивируют их в синтетической питательной среде DMEM,
разведенной до содержания в ней NaCl 0,45 %, с добавлением плазминогена в концентрации 10-7 М.
2
BY 16745 C1 2013.02.28
В качестве контроля используют сестринские культуры, которые помещают в эту же
гипотоническую синтетическую питательную среду без добавления плазминогена.
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 1,5 ч культивирования. Измеряют наибольший и наименьший
диаметры клеток для определения их объема [3] и учитывают количество клеток [2].
При содержании исследуемых клеток в гипотонической (0,45 % NaCl) синтетической
питательной среде 50 % клеток погибают, а в оставшихся развивается гидратация (отек).
Клетки набухают - объем клеток увеличивается на 33 % (контроль).
Пример 4.
Выделяют кору головного мозга новорожденной крысы, подвергают механическому и
ферментативному дезинтегрированию на отдельные клетки, наносят полученную суспензию с плотностью 2,5-3,0×104 клеток/см2 на покрытые коллагеном покровные стекла и
культивируют их в синтетической питательной среде DMEM, разведенной стерильной дистиллированной водой до концентрации NaCl 0,45 %, с добавлением плазминогена в концентрации 10-5 М в атмосфере с 5 %-ным содержанием СO2 и 90 %-ной влажностью при
температуре 37 °С. В качестве контроля используют культуры, которые выращивают в
гипотонический (0,45 % NaCl) питательной среде.
С помощью светового микроскопа оценивают морфологические характеристики исследуемых клеток через 1,5 ч культивирования. Измеряют наибольший и наименьший
диаметры клеток для определения их объема [3] и учитывают количество клеток [2].
При содержании исследуемых клеток в гипотонической (0,45 % NaCl) синтетической
питательной среде DMEM погибает 47 % клеток, а в оставшихся развивается отек (гидратация). Клетки набухают - объем клеток увеличен на 23 % (контроль).
При внесении в питательную среду плазминогена (10-5 М) погибает 11 % клеток, объем оставшихся клеток увеличен на 9 % (опыт).
Источники информации:
l. Nakajiama К., Tsuzaki К., Nagata К., Takemoto N., Kohsacka S. Production and secretion
of plasminogen in cultuted rat brain microglia // FEBS Lett. - 1992. - Vol. 308. - P. 179-182.
2. Патент РБ 8301, МПК7 С 12N 5/06, 2003.
3. Жук О.Н., Калюнов В.Н., Гулецкая Е.Н. Морфометрический анализ симпатических
нейронов при индивидуальном и комбинированном воздействии нейроростового фактора
и гуанетидина // Весцi АН БССР. Сер. бiял. навук. - 1986. - № 1.- С. 56-60.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
3
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
73 Кб
Теги
16745
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа