close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY 07889

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 7889
(13) C1
(19)
(46) 2006.02.28
(12)
7
(51) A 61K 31/195, 31/05,
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
ПРЕПАРАТ, СОДЕРЖАЩИЙ ПРОИЗВОДНОЕ L-ГЛУТАМИНА,
ОБЛАДАЮЩИЙ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ
(21) Номер заявки: a 20000133
(22) 2000.02.14
(43) 2001.09.30
(71) Заявитель: Государственное научное
учреждение "Институт биохимии
Национальной академии наук Беларуси" (BY)
(72) Авторы: Нефёдов Леонид Иванович;
Горецкая Марианна Викторовна;
Мотылевич Жанна Витальевна;
Требухина Раиса Васильевна; Каравай Александр Владимирович (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное научное учреждение "Институт
биохимии Национальной академии
наук Беларуси" (BY)
BY 7889 C1 2006.02.28
A 61P 37/02
(56) RU 2080120 С1, 1997.
RU 2165254 С2, 2001.
Каравай А.В. и др. Международная научная конференция, посвященная 40летию Гродненского государственного
медицинского института: Сборник материалов. - Гродно, 1998, ч. 1. - С. 27.
Леднева И.О. и др. Международная научная конференция, посвященная 40летию Гродненского государственного
медицинского института: Сборник материалов. - Гродно, 1998, ч. 1. - С. 41.
Нефедов Л.И. и др. Клинико-лабораторные аспекты метаболической терапии: Сборник статей 2-й республиканской конференции, посвященной 65-летию со дня основания кафедры биохимии ВГМУ. - Витебск, 1999. - С. 186188.
Горецкая М.В. и др. Клинико-лабораторные аспекты метаболической терапии: Сборник статей 2-й республиканской конференции, посвященной 65-летию со дня основания кафедры биохимии ВГМУ. - Витебск, 1999. - С. 162163.
(57)
Препарат, содержащий производное L-глутамина, обладающий иммуномодулирующей активностью, отличающийся тем, что в качестве производного L-глутамина содержит N-фенилацетил-4-глутамин и дополнительно фенилацетат при массовом соотношении 1,5 : 3,5.
Изобретение относится к области медицины, а именно к лекарственным средствам.
Наиболее близким к предлагаемому по биологическому действию и структуре является антинеопластон AS2-1, представляющий собой смесь фенилацетата и фенилацетилглутамина в соотношении 4 : 1 (Burzynski S.R., Kubove E., Burzynski В. Treatment of hormonally refractory cancer of the prostate with Antineoplaston AS2-1 // Drugs under experimental and
Clinical Research, 1990, V.XVI, No. 7, p. 361-369).
BY 7889 C1 2006.02.28
Недостатком известного препарата является развитие метеоризма, миелосупрессии,
печеночной дисфункции (Tsuda Н., Наrа Н., Eriguchi N. et al. Toxicological study of antineoplaston A10 and AS2-1 in cancer patients // Kurume Med J. 1995.V. 42, No. 42, P. 241-249; Sugita Y.; Tsuda H.; Maruiwa H. et al The effect of Antineoplaston agent on malignant brain tumors // Kurume Med J. 1995. V. 42, No. 3. P. 133-140).
Задачей изобретения является расширение арсенала иммуномодулирующих средств с
низкой токсичностью и высоким терапевтическим индексом.
Указанная задача достигается тем, что создается препарат, обладающий иммуномодулирующей активностью, при этом отличительным моментом является то, что препарат в
качестве производного L-глутамина содержит 1-фенилацетил-4-глутамин и дополнительно фенилацетат при массовом соотношении 1,5 : 3,5.
В табл. 1 представлены данные двух серий опытов о стимулирующей активности препарата различной концентрации и сравнении его с действием митогена ФГА на цельной
крови крыс самцов линии Вистар средней массой 150 г in vitro.
Из табл. 1 видно, что при сравнении ФГА и 1 % препарата, взятых в одинаковых объемах, индекс стимуляции (ИС) был значительно выше у ФГА, но при уменьшении объема
препарата, добавляемого в лунки, ИС увеличивался с 1,7 до 2,27. При дальнейшем уменьшении концентрации и объема препарата показательным результатом был индекс стимуляции препарата 0,01 % концентрации, который превысил ИС митогена и составил 6,5.
В табл. 2 представлены данные, характеризующие зависимость эффекта в реакции
бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) от дозы введения препарата внутрибрюшинно в
концентрациях 250 мг/кг, 25 мг/кг, 2,5 мг/кг, 0,25 мг/кг. Препарат вводили мышам самцам
линии СЗН массой 18-23 г внутрибрюшинно в течение 7 дней 1 раз в сутки. В день постановки реакции препарат вводили за час до начала.
Из данных концентраций доза 2,5 мг/кг увеличила стимуляцию лимфоцитов на 52 %.
При уменьшении этой дозы эффект не наблюдался вообще, а при увеличении концентрации до 25 мг/кг стимуляция составила 40 %. Но, продолжая увеличение концентрации до
250 мг/кг, получили слабое торможение на 10 %. Следовательно, для стимуляции эта дозировка оказалась слишком высокой.
В табл. 3 представлены данные сравнения эффекта препарата концентрацией 1 %,
0,1 %, 0,01 %, 0,001 % на цитотоксическую активность перитонеальных макрофагов с различными клетками-мишенями. Мыши самцы линии СЗН массой 18-23 г за три дня до
начала реакции получили внутрибрюшинно по 2 мл 3 % бактопептона для активации макрофагов. Реакцию определения цитотоксической активности макрофагов ставили в стерильных пластиковых чашках Петри. Используя в качестве клеток-мишеней различные
опухолевые клетки обнаружилась закономерность, что не зависимо от того, какие опухолевые клетки были взяты, максимальный эффект наблюдался при 0,01 % концентрации
препарата.
В табл. 4 представлен эффект подавления клеток хронического миелолейкоза различными концентрациями препарата от 0,001 % до 1 % in vitro. При увеличении концентрации препарата возрастало подавление клеток хронического миелолейкоза. Следовательно,
помимо стимуляции клеток иммунной системы, препарат сам оказывает токсический эффект.
Таким образом, если говорить о иммуномодулирующей активности препарата, то она
наблюдается при концентрациях 2,5-25 мг/кг в опытах in vivo при внутрибрюшинном введении. При увеличении дозы до 250 мг/кг наблюдается слабая иммунодепрессия, а при
уменьшении до 0,25 мг/кг эффект отсутствует. В опытах in vitro иммуностимулирующий
эффект препарата наблюдается при концентрациях 0,1-0,01 %. При уменьшении концентрации до 0,001 % эффекта не наблюдается, а при увеличении концентрации препарата до
1 % наблюдается либо слабое торможение, либо небольшая стимуляция.
Для лучшего понимания данного изобретения приводятся примеры конкретного применения препарата.
2
BY 7889 C1 2006.02.28
Пример 1
У 6 крыс самцов линии Вистар кровь забирали инрокартикально и ставили РБТЛ в
стерильных пластиковых планшетах, сравнивая препарат 1 % концентрации с действием
митогена фитогемагглютинина (ФГА). Импульс стимуляции препарата был значительно
ниже, чем у ФГА, но был выявлен дозазависимый эффект. После чего с ФГА сравнивали
препарат с концентрациями 1 % и более низкими 0,1 % и 0,01 %. Максимальный эффект
был зафиксирован у препарата с концентрацией 0,01 %, который оказался выше, чем импульс стимуляции ФГА (табл. 1).
Пример 2
Шести мышам линии СЗН массой 18-23 г внутрибрюшинно вводили препарат концентрацией 250 мг/кг, 25 мг/кг, 2,5 мг/кг. Через час после введения ставили РБТЛ in vitro.
Концентрация 250 мг/кг оказала слаботормозящее действие. При уменьшении концентрации до 25 мг/кг получили стимулирующий эффект. Максимально стимулирующий эффект
получили, уменьшив концентрацию до 2,5 мг/кг. Результаты представлены в табл. 2.
Пример 3
На перитонеальных макрофагах шести мышей самцов серии СЗН массой 18-23 г сравнивали действие препарата в зависимости от его концентрации (1-0,001 %) и от выбора
различных клеток-мишеней: асцитная опухоль Эрлиха, рак молочной железы, хронический миелолейкоз, острый миелобластный лейкоз, рак почки. В эксперименте была прослежена четкая зависимость доза-эффект. При уменьшении концентрации препарата до
0,01 % эффект возрастал, при 0,001 % концентрации эффект уже отсутствовал. Следовательно, эта концентрация оказалась слишком низкой. При выборе различных клетокмишеней лучшие показатели оказались у клеток рака почки, чуть меньше - у асцитной
опухоли Эрлиха, а клетки хронического миелолейкоза и острого миелобластного лейкоза
ответили практически одинаково (табл. 3). При концентрации препарата 1 % наблюдалось
слабое подавление цитотоксического эффекта.
Пример 4
Было изучено действие препарата на клетки хронического миелобластного лейкоза.
Выяснилось, что здесь наблюдается обратная зависимость. При увеличении концентрации
препарата увеличивался токсический эффект (табл. 4).
Пример 5
Жизнеспособность лимфоцитов, культивируемых совместно с препаратом с различными концентрациями (от 2 % до 0,001 %), определяли в тесте с трипановым синим. После подсчета клеток в камере Горяева их жизнеспособность составила 95 %. Это подтверждает низкую токсичность препарата.
Таким образом, предлагаемый препарат обладает выраженным иммуномодулирующим эффектом и может быть использован в медицинской практике.
Таблица 1
Зависимость индекса стимуляции в реакции бласттрансформации лимфоцитов
от концентрации препарата in vitro
Препараты
Концентрация (мкл)
ИС
ФГА
60
4,1
ДГ 1 %
60
1,7
ДГ 1 %
20
2,0
ДГ 1 %
10
2,27
ДГ 0,1 %
40
2,2
ДГ 0,01 %
40
6,5
Примечание: ФГА - митоген, фитогемагглютинин (1 : 120);
ДГ - препарат, содержащий производное L-глутамина.
3
BY 7889 C1 2006.02.28
Таблица 2
Зависимость эффекта в РБТЛ от дозы препарата через 1 час после введения in vivo
Доза ДГ
Эффект
Индекс
250 мг/кг
торможение
10 %
25 мг/кг
стимуляция
40 %
2,5 мг/кг
стимуляция
52 %
0,25 мг/кг
= контролю
Примечание: ФГА - митоген, фитогемагглютинин;
ДГ - препарат, содержащий производное L-глутамина.
Таблица 3
Зависимость цитотоксической активности перитонеальных макрофагов от концентрации препарата, содержащего производное L-глутамина.
Сравнение эффекта препарата с различными клетками мишенями in vitro
Концентрация
препарата
ОП + МФ
ОП + МФ + ДГ 1 %
ОП + МФ + ДГ 0,1 %
ОП + МФ + ДГ 0,01 %
ОП + МФ + ДГ 0,001 %
Острый
миелобластный лейкоз
19,3 %
18,0 %
37,0 %
44,0 %
20,6 %
Хронический
миелобластный
лейкоз
24,0 %
22,0 %
41,5 %
46,0 %
25,0 %
АОЭ
РМЖ
Рак почки
19,0 %
16,0 %
41,0 %
75,0 %
19,0 %
21,0 %
25,0 %
40,0 %
45,0 %
22,5 %
66,0 %
67,0 %
70,0 %
88,0 %
65,7 %
Примечание: МФ - макрофаги;
ДГ - препарат, содержащий производное L-глутамина;
АОЭ - клетки асцитной опухоли Эрлиха;
РМЖ - рак молочной железы.
Таблица 4
Влияние различных концентраций препарата на клетки
хронического миелолейкоза in vitro
Концентрация препарата
Эффект подавления
ОП + ДГ 1 %
40 %
ОП + ДГ 0,1 %
29 %
ОП + ДГ 0,01 %
18 %
ОП + ДГ 0,001 %
6%
Примечание: ОП - опухолевые клетки;
ДГ - препарат, содержащий производное L-глутамина.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
89 Кб
Теги
07889, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа