close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY 08337

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 8337
(13) C1
(19)
(46) 2006.08.30
(12)
7
(51) G 01N 21/64
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
СПОСОБ ФЛУОРИМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИАМИНА
В КОРМАХ, ПРОДОВОЛЬСТВЕННОМ СЫРЬЕ ИЛИ ПИЩЕВЫХ
ПРОДУКТАХ
BY 8337 C1 2006.08.30
(21) Номер заявки: a 20030846
(22) 2003.09.03
(43) 2005.03.30
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Республиканский научнопрактический центр гигиены" (BY)
(72) Авторы: Шуляковская Ольга Васильевна; Белышева Людмила Леонидовна; Соколов Сергей Михайлович;
Воронцова Ольга Сергеевна (BY)
(73) Патентообладатель: Государственное учреждение "Республиканский
научно-практический центр гигиены" (BY)
(56) Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов. - М.: Брандес, Медицина, 1998. С. 150-155.
Витамины. - Киев: Издательство Академии наук УССР, 1953. - С. 45-50.
Экспериментальная витаминология. Минск: Наука и техника, 1979. С. 195-197.
ГОСТ 30627.5-98. Продукты молочные для детского питания. Метод измерения массовой доли витамина В1
(тиамина).
Березовский В.М. Химия витаминов. –
Москва: Пищевая промышленность,
1973. - С. 380.
Шеряков А.А. и др. // Рецепт. - 2002. Т. 21, № 1. - С. 24-27.
Шеряков А.А. и др. // Здравоохранение. - 2002. - № 3. - С. 48-50.
JP 56-112650 A, 1981.
(57)
Способ флуориметрического определения тиамина в кормах, продовольственном сырье или пищевых продуктах, включающий кислотный и ферментативный гидролиз исследуемого образца, очистку гидролизата от примесей, окисление содержащегося в образцах
тиамина в тиохром, экстракцию тиохрома, измерение интенсивности флуоресценции тиохрома в сравнении со стандартным раствором и вычисление содержания тиамина, отличающийся тем, что в качестве фермента для ферментативного гидролиза используют
такадиастазу, а для очистки гидролизата от примесей используют 50 %-ный раствор трихлоруксусной кислоты.
Изобретение относится к медицине, к разделу лабораторной диагностики, а также
сельскому хозяйству и пищевой промышленности.
Известен способ определения тиамина в молочных продуктах для детского питания
путем кислотного гидролиза исследуемых образцов с их последующей ферментацией ферментами амилоризином или пектофоэтидином, очисткой фильтрата от примесей и окислением тиамина в щелочной среде железосинеродистым калием с образованием сильно
BY 8337 C1 2006.08.30
флуоресцирующего в ультрафиолетовом свете соединения - тиохрома, интенсивность
флуоресценции которого прямо пропорциональна массовой доле тиамина [1]. Способ является аналогом по отношению к заявляемому.
Однако указанный способ имеет недостатки. Во-первых, ограничен определением тиамина только в молочных продуктах. Во-вторых, ферментный гидролиз проводится в течение 14-16 часов, что удлиняет время определения.
Известен способ флуориметрического определения тиамина в пищевых продуктах путем проведения кислотного и ферментативного гидролиза, хромато-графической очистки
полученного гидролизата от соединений, мешающих флуориметрическому определению,
количественного перевода в щелочной среде тиамина в тиохром, экстракцией тиохрома и
измерения интенсивности флуоресценции тиохрома в сравнении со стандартным раствором с помощью флуориметра [2].
Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому. Однако к недостаткам известного способа относятся длительное время проведения ферментативного
гидролиза (14-16 часов) и использование хроматографической очистки, что усложняет определение тиамина и уменьшает точность определения из-за потерь тиамина на сорбентах.
Задачей заявляемого изобретения является сокращение времени ферментативного гидролиза, упрощение очистки гидролизата, сокращение времени очистки и повышение точности определения.
Поставленная задача достигается следующим образом.
Представлен способ флуориметрического определения тиамина в кормах, продовольственном сырье или пищевых продуктах, включающий кислотный и ферментативный гидролиз исследуемого образца, очистку гидролизата от примесей, окисление содержащегося в
образцах тиамина в тиохром, экстракцию тиохрома, измерение интенсивности флуоресценции тиохрома в сравнении со стандартным раствором и вычисление содержания тиамина,
при этом, в качестве фермента для ферментативного гидролиза используют такадиастазу,
а для очистки гидролизата от примесей используют 50 %-ный раствор трихлоруксусной
кислоты.
Пример 1. Определение тиамина в пищевых продуктах.
1. Кислотный гидролиз.
Навеску продукта 6,0-8,0 г помещают в колбу вместимостью 250 см3 и приливают 150 см3
соляной кислоты концентрацией 0,1 моль/дм3.
Гидролиз осуществляют на кипящей водяной бане в течение 40 мин. По окончании
гидролиза колбу с содержимым охлаждают до температуры 18-25 °С, добавляют 5-7 см3
насыщенного раствора натрия уксуснокислого и 1 см3 толуола.
2. Ферментативный гидролиз.
К полученной по п. 1 смеси добавляют 5 см3 2 %-ного раствора такадиастазы и помещают в термостат, где выдерживают 3 часа при температуре (50 ± 1) °С. После этого гидролизат охлаждают до 18-25 °С.
3. Очистка гидролизата.
К полученному по п. 2 гидролизату добавляют 5 см3 50 %-ного раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и переносят содержимое в мерную колбу вместимостью
250 см3, доводят объем до метки дистиллированной водой и фильтруют.
4. Окисление тиамина в тиохром.
В 4 градуированные пробирки с притертыми пробками объемом 25 см3 вносят по 5 см3
фильтрата, полученного по п. 3, добавляют по 2 см3 этилового спирта и встряхивают. Затем
в 2 пробирки добавляют по 1,2 см3 свежеприготовленной окислительной смеси (смесь 2 см3
1 %-ного раствора железосинеродистого калия и 10 см3 раствора гидроокиси натрия концентрацией 0,3 г/ см3), в две другие - по 1,2 см3 раствора гидроокиси натрия концентрацией 0,3 г/см3 (контроль). Все пробирки энергично встряхивают.
2
BY 8337 C1 2006.08.30
5. Экстракция.
Для извлечения тиохрома во все пробирки по п. 4 прибавляют по 13 см3 бутилового
или изобутилового спирта и энергично встряхивают в течение 1 мин, затем помещают в
темное место на 10 мин. После этого сливают верхний слой бутилового спирта, добавляют
по 2 см3 этилового спирта и помещают в кюветы для измерения интенсивности флуоресценции.
Аналогичным образом по пп. 4 и 5 поступают со стандартным раствором тиамина концентрацией 0,2 мкг/ см3.
6. Измерение интенсивности флуоресценции тиохрома.
Интенсивность флуоресценции тиохрома измеряют при светофильтрах, дающих диапазон длины волн возбуждения в области 360-390 нм и флуоресценции - 400-450 нм, начиная с проб стандартного раствора тиамина.
7. Обработка результатов.
Содержание тиамина (X) в мг/100 г продукта вычисляют по формуле:
X=
(A − A1 ) × M × V
,
(B − B1 ) × V1 × M1 × 10
где А - среднее из показаний флуориметра для испытуемой пробы, ед. прибора;
A1 - показание флуориметра для контроля к испытуемой пробе, ед. прибора;
В - показание флуориметра для стандартного раствора тиамина, ед. прибора;
B1 - показание флуориметра для контроля к стандартному раствору тиамина, ед. прибора;
М - массовая доля тиамина во взятом для окисления тиамина в тиохром объеме стандартного раствора, мкг;
V - общий объем гидролизата, см3;
V1 - объем испытуемого раствора, взятого для окисления тиамина в тиохром, см3;
М1 - масса пробы продукта, взятой для анализа, г;
10 - пересчет из мкг/г в мг/100 г продукта.
Вычисления проводят с точностью до третьего десятичного знака с последующим округлением до второго десятичного знака.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое значение
результатов двух параллельных определений.
Результаты определения тиамина в пищевых продуктах предлагаемым способом представлены в таблице.
Таблица
Определение тиамина в пищевых продуктах
Время ферментаСпособ опреСпособ очистки гидроли- Время
Выход тиамина,
тивного гидролиделения
зата
очистки, ч
%
за, ч
хроматографическая коИзвестный (по
14-16
лонка с катионитом КРС
3
75
прототипу)
3пТ-40
Предлагаемый
3
50 %-ный раствор трихлоруксусной кислоты
1
82
Пример 2. Определение тиамина в кормах.
Определение тиамина в кормах проводится аналогично примеру 1.
Пример 3. Определение тиамина в продовольственном сырье.
Определение тиамина в продовольственном сырье проводится аналогично примеру 1.
3
BY 8337 C1 2006.08.30
Таким образом, по сравнению с прототипом заявляемый способ обладает следующими
преимуществами:
сокращает время ферментативного гидролиза в 4-5 раз;
упрощает стадию очистки гидролизата и сокращает время очистки в 3 раза;
повышает на 7 % точность определения;
заменяет дефицитные ферменты (амилоризин и пектофоэтидин П 10 X) используемые
в прототипе на такадиастазу.
Источники информации:
1. ГОСТ 30627.5-98. Продукты молочные для детского питания. Метод измерения массовой доли витамина B1 (тиамина). Введ. 01.05.2000. - Минск: Изд-во стандартов, 1999. С. 6 (аналог).
2. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов/Под
ред. И.М. Скурихина, В.А. Тутельяна. - М.: Брандес, Медицина, 1998. - С. 150-155 (прототип).
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
84 Кб
Теги
08337, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа