close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY 12440

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2009.10.30
(12)
(51) МПК (2006)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
BY (11) 12440
(13) C1
(19)
G 01N 33/49
СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ДЕСТРУКТИВНОЙ ФОРМЫ
ОСТРОГО ХОЛЕЦИСТИТА ПРИ МАЛОСИМПТОМНОЙ
КЛИНИЧЕСКОЙ КАРТИНЕ
(21) Номер заявки: a 20080071
(22) 2008.01.22
(43) 2009.08.30
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Республиканский научнопрактический центр гигиены" (BY)
(72) Авторы: Якубовский Сергей Владимирович; Ткачев Сергей Викторович
(BY)
(73) Патентообладатель: Государственное
учреждение "Республиканский научнопрактический центр гигиены" (BY)
(56) ГОРОБЕЦЬ Р.М. Прогнозування перебiгу гострого холециститу та його
ускладнень: Автореферат дисертацiï. Вiнниця, 2004. - C. 2-15.
RU 2140189 C1, 1999.
RU 2190347 C2, 2002.
BY 12440 C1 2009.10.30
(57)
Способ диагностики деструктивной формы острого холецистита при малосимптомной
клинической картине, отличающийся тем, что в 1 %-ной сыворотке крови больного, полученной разведением 0,07М фосфатным буфером с pH 7,4, определяют интенсивность
флуоресценции битирозина при длине волны возбуждения 325 нм и длине волны испускания 416 нм и при получении значения 1,02 условных единиц или выше диагностируют
деструктивную форму острого холецистита.
Изобретение относится к медицине, к разделу хирургии и клинической и лабораторной диагностики.
Известен способ ранней диагностики осложненных, в том числе деструктивных, форм
острого холецистита (ОХ) при малосимптомной клинической картине заболевания путем
определения уровня продуктов окислительной модификации белков (ОМБ), а именно карбонильных групп белков - в сыворотке крови больного [1]. Диагностически значимым является факт повышения их уровня. Указанный способ является прототипом по отношению
к заявленному.
Общим признаком для заявленного способа и прототипа является определение уровня
продуктов ОМБ в сыворотке крови при поступлении. Однако способ-прототип обладает
следующими недостатками. В источнике не указан диагностически значимый уровень содержания карбонильных групп в сыворотке крови, при достижении которого можно судить о наличии осложненной, в том числе деструктивной, формы ОХ. В связи с этим
представляется затруднительной адекватная интерпретация данных обследования, особенно в тех случаях, когда наблюдается малосимптомная клиническая картина заболевания и хирургу крайне важно определиться с тактикой лечения и выбрать оптимальный ее
вариант - или консервативный, или хирургический.
BY 12440 C1 2009.10.30
Способ-прототип такую возможность хирургу не предоставляет, поскольку, помимо
того что не указан диагностически значимый уровень содержания продуктов ОМБ, он недостаточно специфичен; в силу этого диагностическая эффективность теста будет снижена. Кроме того, для диагностики используются нестабильные химические соединения карбонильные группы белков, которые активно участвуют в различных реакциях в физиологических условиях, что ограничивает их информативность при оценке интенсивности
процессов ОМБ [2].
Задачей заявляемого изобретения является повышение точности дооперационной диагностики деструктивных форм острого холецистита при малосимптомной клинической
картине заболевания.
Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ диагностики
деструктивной формы острого холецистита при малосимптомной клинической картине, когда в
1 %-ной сыворотке крови больного, полученной разведением 0,07М фосфатным буфером
с pH 7,4, определяют интенсивность флуоресценции битирозина при длине волны возбуждения 325 нм и длине волны испускания 416 нм и при получении значения 1,02 условных единиц или выше диагностируют деструктивную форму острого холецистита.
Развитие острого холецистита (ОХ) сопровождается возникновением и прогрессированием синдрома эндогенной интоксикации (ЭИ). Существенным фактором, влияющим на
развитие ЭИ, независимо от этиологии последней, является активация свободнорадикальных процессов, реализующаяся в виде окислительной модификации белков (ОМБ) [3].
В последние годы внимание исследователей привлекает роль ОМБ в патогенезе острых воспалительных процессов. Показано, что окисление белков является надежным и
ранним маркером окислительных повреждений [2, 4].
Заявителем было изучено содержание ряда продуктов ОМБ у больных, среди которых
были выделены группы исследуемых с катаральным (1-я) и деструктивным (2-я) ОХ, подтвержденными до операции повышением уровня битирозина в сыворотке крови, а также в
послеоперационном периоде - при патоморфологическом исследовании препаратов удаленных желчных пузырей.
Повышение уровня битирозина в сыворотке крови и тканях экспериментальных животных и человека принято считать более надежным маркером ОМБ, отражающим как
динамику, так и интенсивность процесса. Это обусловлено тем, что битирозин не утилизируется протеиназами, а является химически устойчивым соединением, в отличие от других продуктов ОМБ, таких как карбонильные группы белков [2].
Флуоресценцию битирозина в сыворотке крови измеряли в щелочной среде (0,7М
NaOH, рН 13) при λвозб. = 325 нм и λисп. = 416 нм [5, 6]. Для флуоресцентных исследований готовили 1 %-ным раствор сыворотки крови на 0,07М фосфатном буфере (pH 7,4).
Оптическая плотность раствора сыворотки в области используемых длин волн возбуждения и испускания флуоресценции не превышала 0,1. Все измерения флуоресценции проводили при температуре 210 °С в кварцевой кювете с длиной оптического пути 10 мм, при
ширине щелей монохроматоров возбуждения и испускания 5 нм. Интенсивность флуоресценции выражали в условных единицах. Измерения выполнены на спектрофлуориметре
СМ 2203 (ЗАО "Солар", Беларусь).
Как видно из представленных в табл. 1 данных, в группе больных с острым деструктивным холециститом (ОДХ) при поступлении в стационар отмечалось повышение интенсивности ОМБ, о чем свидетельствовало достоверное увеличение содержания битирозина
в сыворотке крови по сравнению с контрольной группой. Через 48-72 часа, несмотря на
проводимую консервативную терапию, у этих пациентов сохранялось достоверное повышение уровня битирозина относительно контрольных значений; лишь на 2-3 сутки послеоперационного периода уровень битирозина снижался до контрольных значений. У больных с
катаральным ОХ на протяжении всего периода нахождения в стационаре уровень битирозина достоверно не отличался от контрольных значений.
2
BY 12440 C1 2009.10.30
Динамика изменений интенсивности ОМБ у больных с ОХ
Сроки определения
Таблица 1
Битирозин, усл. ед.
0,79±0,020
Контроль
1-я группа
При поступлении
Перед операцией
2-3 сутки после операции
7-8 сутки после операции
0,78±0,10
0,97±0,16
0,86±0,08
0,71±0,11
2-я группа
При поступлении
Перед операцией
2-3 сутки после операции
7-8 сутки после операции
1,92±0,29*#
1,04±0,12*
0,85±0,13
1,12±0,31
Примечание: *p<0,05 - достоверность по сравнению с контролем;
#p<0,05 - достоверность по сравнению с группой 1.
Использование однофакторного дисперсионного анализа позволило установить, что
уровни битирозина и ПНГБ являются прогностическими факторами выявления ОДХ.
Для количественной характеристики диагностической значимости этих показателей
заявителем были использованы: диагностически значимый уровень; чувствительность и
специфичность, характеризующие надежность теста; прогностическая ценность положительного и отрицательного результатов, оценивающие его прогностическую значимость;
точность или диагностическая эффективность теста, которая является интегральным показателем, определяемым его чувствительностью и специфичностью [7] (табл. 2).
Показано, что специфичность предлагаемого метода составила 100 %, чувствительность - 76,9 %, а его диагностическая эффективность оказалась в пределах 83,3 %.
Таблица 2
Показатели диагностической значимости определения уровня битирозина
в сыворотке крови больных с ОХ
Показатель
Диагностически значимый уровень
Чувствительность
Специфичность
Прогностическая ценность положительного результата
Прогностическая ценность отрицательного результата
Точность (диагностическая эффективность)
Битирозин,
усл. ед.
1,02
76,9 %
100,0 %
66,67 %
37,5 %
83,3 %
Пример 1
Больной А., 65 лет. Предварительный диагноз: острый холецистит. Требуется определить характер воспалительного процесса в стенке желчного пузыря и соответственно выбрать необходимую тактику лечения. Для этого у больного при поступлении определяют
уровень битирозина в сыворотке крови, который равен 1,46 усл. ед. Больному подтвержден диагноз: острый деструктивный холецистит; показана экстренная операция - холецистэктомия. Гистологически диагноз подтвержден.
Пример 2
Больная В., 71 год. Предварительный диагноз: острый холецистит. Требуется определить характер воспалительного процесса в стенке желчного пузыря. Для этого у больной
при поступлении определяют уровень битирозина в сыворотке крови, который равен
3
BY 12440 C1 2009.10.30
0,65 усл. ед. Подтвержден диагноз: острый холецистит. Показана консервативная терапия,
направленная на купирование воспалительного процесса, и оперативное лечение в плановом порядке.
Таким образом, достигаемый технический результат заявляемого способа заключается
в повышении точности дооперационной диагностики деструктивных форм острого холецистита, что позволяет решать вопросы ранней диагностики деструктивных изменений
желчного пузыря, своевременно выявлять его осложнения и повысить эффективность
проводимой терапии.
Источники информации:
1. Горобец Р.Н. Прогнозирование течения острого холецистита и его осложнений: Автореф. дис. … канд. мед. наук. - Винница, 2004. - С. 17.
2. Huggins Т.G., Wells-Knecht M.C., Detorie N.A. et al. Formation of otyrosine and dityrosine in proteins during radiolytic and metal-catalyzed oxidation. J. Biol Chem. 1993 Jun 15;
268(17). - P. 12341.
3. Пасечник И.Н. Окислительный стресс как компонент формирования критических
состояний у хирургических больных: Автореф. дис. докт. мед. наук. - М., 2004. - С. 41.
4. Dean R.T., Fu S., Stacker R. et al. Biochemistry and pathology of radical-mediated protein oxidation // Biochem. J. - 1997. - Vol. 324. - P. 1.
5. Дубинина Е.Е., Гавровская С.В., Кузьмич Е.В. и др. Окислительная модификация
белков: окисление триптофана и образование битирозина в очищенных белках с использованием системы Фентона // Биохимия. - 2002. - Т. 67. - С. 414.
6. Davies K.J. Protein damage and degradation by oxygen radicals. I. General aspects // J.
Biol. Chem. - 1987. - Vol. 262, № 20. - P. 9896.
7. Флетчер Р., Флетчер С., Вагнер Э. Клиническая эпидемиология. Основы доказательной медицины. - М.: Медиа Сфера, 1998. - С. 77.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
4
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
91 Кб
Теги
патент, 12440
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа