close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY 13452

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2010.08.30
(12)
(51) МПК (2009)
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
A 61K 39/116
C 12N 1/20
ВАКЦИНА ПОЛИВАЛЕНТНАЯ ИНАКТИВИРОВАННАЯ ПРОТИВ
ЛЕПТОСПИРОЗА СВИНЕЙ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВАКЦИНЫ
(21) Номер заявки: a 20081198
(22) 2008.09.22
(43) 2009.04.30
(71) Заявитель: Учреждение образования
"Витебская ордена "Знак Почета"
государственная академия ветеринарной медицины" (BY)
(72) Авторы: Зайцев Владимир Владимирович; Зайцева Алеся Владимировна; Дремач Геннадий Эдуардович;
Кондратенко Мария Юльяновна;
Шашкова Юлия Аркадьевна (BY)
(73) Патентообладатель: Учреждение образования "Витебская ордена "Знак
Почета" государственная академия
ветеринарной медицины" (BY)
BY 13452 C1 2010.08.30
BY (11) 13452
(13) C1
(19)
(56) ПАНИН А.Н. и др. Ветеринария. 2002. - № 1. - C. 21-24.
SU 555664, 1983.
UA 32966 U, 2008.
RU 2096042 C1, 1997.
ГАЙСЕНОК С.Л. и др. Сельское хозяйство - проблемы и перспективы:
Сб. научн. тр. - Гродно, 2006. - Т. 3. C. 225-230.
ЗАЙЦЕВ В.В. и др. Современные вопросы патологии сельскохозяйственных животных. Международная научно-практическая конференция. - Минск,
2003. - C. 117-118.
ЗАЙЦЕВ В.В. и др. Ученые записки
УО ВГАВМ, 2007. Т. 43. Вып. 2. C. 48-51.
SU 828459, 1983.
SU 100456, 1955.
(57)
1. Вакцина поливалентная инактивированная против лептоспироза свиней, содержащая инактивированный и концентрированный лептоспирозный антиген из штаммов лептоспир серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa, Cаnicola и Icterohaеmorrhagiae и
адъювант, отличающаяся тем, что содержит антиген, полученный концентрированием до
4 млрд. микробных клеток/см3 инактивированной смеси культур указанных штаммов,
выращенных до концентрации 400-780 млн. микробных клеток/см3 и взятых в равных
частях, и масляный адъювант и дополнительно содержит иммуномодулятор и стабилизатор при следующем соотношении компонентов, мас. %:
инактивированный поливалентный лептоспирозный
антиген, содержащий 4 млрд. микробных клеток/см3
15,0
иммуномодулятор
0,4-2,0
стабилизатор
13,0-14,6
масляный адъювант
остальное,
при этом иммуномодулятор имеет следующий состав, мас. %:
липополисахаридпептидная фракция О-антигена
бактерий рода Escherichia или Salmonella
5,0
вода очищенная
остальное,
а стабилизатор имеет следующий состав, мас. %:
глюкоза
50,0
вода очищенная
остальное.
BY 13452 C1 2010.08.30
2. Способ получения вакцины поливалентной инактивированной против лептоспироза
свиней, включающий смешивание компонентов, отличающийся тем, что предварительно
готовят антиген путем смешивания в равных частях культур штаммов лептоспир серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa, Cаnicola и Icterohaеmorrhagiae, выращенных глубинным культивированием в ферментере газо-вихревого типа при температуре 28 °С в
течение 60-72 часов на оптимизированной питательной среде, содержащей фактор роста,
до концентрации 400-780 млн. микробных клеток/см3, инактивирования полученной смеси
и концентрирования до 4 млрд. микробных клеток/см3, антиген смешивают с иммуномодулятором, стабилизатором и масляным адъювантом в массовом соотношении 15 : (0,42,0) : (13,0-14,6) : (68,4-71,6) соответственно.
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к производству
препаратов против лептоспироза.
От момента создания первых вакцин Э. Дженнера против оспы человека (1796) и вакцин Пастера против сибирской язвы (1881) и других вакцинопрофилактика стала незаменимым средством в борьбе с инфекционными болезнями животных и человека.
Первую вакцину против лептоспироза предложили в 1916 году Wani, Ido, Hoki в Японии для профилактики лептоспироза у шахтеров.
До 1978 года для профилактики лептоспироза животных применяли поливалентную
фенольную вакцину. С 1978 года была внедрена в производство депонированная вакцина
ВГНКИ, которая при однократном введении вызывала формирование иммунитета большей напряженности и продолжительности, чем фенольная вакцина при двукратной инъекции. В настоящее время для профилактики лептоспироза животных применяют
концентрированную и сухую вакцины [3, 4, 5].
Наиболее близким техническим решением к предлагаемому изобретению является
вакцина против лептоспироза животных лиофилизированная [1, 2].
В известном способе лептоспирозные бактерии выращивают на твин-альбуминовой
среде до 350-500 млн. микробных клеток/см3. Лептоспирозные бактерии выращивали путем глубинного культивирования. В процессе культивирования перемешивание растущей
культуры проводят в течение 5 мин по два раза в сутки при 50-60 об/мин мешалки. Культуру лептоспир концентрировали до получения концентрации клеток 1,5-2,0 млрд. микробных клеток/см3. Защитную среду добавляют к концентрированной культуре лептоспир
в соотношении 1:1. Защитную среду используют следующего состава: 20 % сахарозы, 4 %
желатина, 1 % пептона, 75 % фосфатного буфера. К смеси концентрированной культуры
лептоспир и защитной среды добавляют простерилизованный 6 %-ный гидрат окиси алюминия в количестве 20 % к объему вакцины, дополнительно добавляют раствор мертиолята из расчета 1 г на 10 л вакцины. Далее вакцину перегружают в сублиматор с
предварительно охлажденным до минус 60-65 °С конденсатором. Камеру с вакциной вакуумируют до предельного остаточного давления 4-6 Па.
Через 2-3 ч после вакуумирования включают подогрев полок, при этом конечная температура полок 30 °С достигалась в течение 3-4 ч и поддерживалась автоматически в данном режиме до конца процесса сушки.
В течение 30-35 ч происходит сублимация влаги при температуре продукта от -40 до
-20 °С. Затем следует быстрое нарастание температуры продукта от -20 до +24 °С за 1012 ч. Далее идет досушивание вакцины при ее конечной температуре 24-26 °С в течение
22-24 ч. Общее время сушки составляет 72-76 ч.
После окончания процесса высушивания камеру установки заполняют сухим очищенным азотом. Вакцину переносят в бокс, флаконы укупоривают стерильными пробками
УЛ-1 и обкатывают алюминиевыми колпачками.
2
BY 13452 C1 2010.08.30
Вакцина такого состава не обеспечивает высокого иммунного ответа у животных, метод ее изготовления сложный и нетехнологичен.
Цель изобретения - повышение биологической активности целевого продукта, упрощение и удешевление технологии.
Поставленная цель достигается тем, что штаммы лептоспир серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa, Canicola и Icterohaemorrhagiae выращивают глубинным методом в
течение 60-72 ч в ферментере газо-вихревого типа при температуре 28 °С на оптимизированной питательной среде, содержащей фактор роста до концентрации клеток 400780 млн./см3.
Далее культуры лептоспир разных серогрупп смешивают в равных соотношениях,
инактивируют. Смесь инактивированных культур лептоспир разных серогрупп концентрируют методом ультрафильтрации до содержания 4 млрд. микробных клеток/см3, и
смешивают с иммуномодулятором и стабилизатором, и эмульгируют в масляном адъюванте.
Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что вакцина поливалентная
инактивированная против лептоспироза свиней, содержащая инактивированный и концентрированный лептоспирозный антиген из штаммов лептоспир серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa, Canicola и Icterohaemorrhagiae и адъювант, отличается тем, что
содержит антиген, полученный концентрированием до 4 млрд. микробных клеток/см3
инактивированной смеси культур указанных штаммов, выращенных до концентрации 400780 млн. микробных клеток/см3 и взятых в равных частях, и масляный адъювант и дополнительно содержит иммуномодулятор и стабилизатор при следующем соотношении компонентов, мас. %:
инактивированный поливалентный лептоспирозный
антиген, содержащий 4 млрд. микробных клеток/см3
15,0
иммуномодулятор
0,4-2,0
стабилизатор
13,0-14,6
масляный адъювант
остальное,
при этом иммуномодулятор имеет следующий состав, мас. %:
липополисахаридпептидная фракция О-антигена
бактерий рода Escherichia или Salmonella
5,0
вода очищенная
остальное,
а стабилизатор имеет следующий состав, мас. %:
глюкоза
50,0
вода очищенная
остальное.
Способ получения вакцины поливалентной инактивированной против лептоспироза
свиней, включающий смешивание компонентов, отличается тем, что предварительно готовят антиген путем смешивания в равных частях культур штаммов лептоспир серогрупп
Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa, Canicola и Icterohaemorrhagiae, выращенных глубинным
культивированием в ферментере газо-вихревого типа при температуре 28 °С в течение 6072 ч на оптимизированной питательной среде, содержащей фактор роста, до концентрации
400-780 млн. микробных клеток/см3, инактивирования полученной смеси и концентрирования до 4 млрд. микробных клеток/см3, антиген смешивают с иммуномодулятором, стабилизатором и масляным адъювантом в массовом соотношении 15 : (0,4-2,0) : (13,014,6) : (68,4-71,6) соответственно.
Пример 1.
Лептоспирозные бактерии серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa, Canicola и Icterohaemorrhagiae выращивали глубинным методом в ферментере газо-вихревого типа при
температуре 28 °С в течение 60-72 ч на оптимизированной питательной среде, содержащей фактор роста, до концентрации 400-780 млн. микробных клеток/см3.
3
BY 13452 C1 2010.08.30
Далее смешивали в равных частях инактивированные и концентрированные до
4 млрд. микробных клеток/см3 лептоспирозные бактерии серогрупп Pomona, Tarassovi,
Grippotyphosa, Canicola и Icterohaemorrhagiae.
Вакцину поливалентную инактивированную против лептоспироза свиней готовили
путем смешивания инактивированного и концентрированного лептоспирозного антигена,
адъюванта, иммуномодулятора и стабилизатора при следующем соотношении компонентов, мас. %:
инактивированный поливалентный лептоспирозный
антиген, содержащий 4 млрд. микробных клеток /см3
15,0
иммуномодулятор
0,4
стабилизатор
13,0
масляный адъювант
остальное,
при этом иммуномодулятор имеет следующий состав, мас. %:
липополисахаридполипептидная фракция О-антигена
бактерий рода Escherichia или Salmonella
5,0
вода очищенная
остальное,
а стабилизатор имеет следующий состав, мас. %:
глюкоза
50,0
вода очищенная
остальное.
Поливалентный инактивированный лептоспирозный антиген, иммуномодулятор, стабилизатор и масляный адъювант смешивали в соотношении 15 : 0,4 : 13 : 71,6.
На активность вакцину проверяли путем установления ее антигенных свойств. Для
этого пяти кроликам массой 2,5 кг препарат вводили внутримышечно однократно в дозе
0,75 см3. Через 24 дня после введения вакцины у кроликов брали кровь, готовили из нее
сыворотку и определяли титр антител в РМА.
Реакцию ставили с лептоспирами всех серогрупп, которые входят в состав вакцины.
Титром считали наибольшее разведение сыворотки, при котором реакция оценивалась не
менее чем на 2 креста.
Титр антител в сыворотке крови кроликов с лептоспирами серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa составил 1 : 800, а с лептоспирами серогрупп Canicola и Icterohaemorrhagiae - 1 : 200.
Пример 2.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но поливалентный инактивированный
лептоспирозный антиген, иммуномодулятор, стабилизатор и масляный адъювант смешивали в соотношении 15 : 2 : 14,6 : 68,4.
Титр антител в сыворотке крови кроликов с лептоспирами серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa составил 1 : 800, а с лептоспирами серогрупп Canicola и Icterohaemorrhagiae - 1 : 200.
Пример 3.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но поливалентный инактивированный
лептоспирозный антиген, иммуномодулятор, стабилизатор и масляный адъювант смешивали в соотношении 15 : 0,4 : 14,6 : 70.
Титр антител в сыворотке крови кроликов с лептоспирами серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa составил 1 : 800, а с лептоспирами серогрупп Canicola и Icterohaemorrhagiae - 1 : 200.
Пример 4.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но поливалентный инактивированный
лептоспирозный антиген, иммуномодулятор, стабилизатор и масляный адъювант смешивали в соотношении 15 : 2 : 13 : 70.
4
BY 13452 C1 2010.08.30
Титр антител в сыворотке крови кроликов с лептоспирами серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa составил 1 : 800, а с лептоспирами серогрупп Canicola и Icterohaemorrhagiae - 1 : 200.
Пример 5.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но поливалентный инактивированный
лептоспирозный антиген, иммуномодулятор, стабилизатор и масляный адъювант смешивали в соотношении 14 : 0,3 : 12 : 73,7.
Титр антител в сыворотке крови кроликов с лептоспирами серогрупп Pomona, Tarassovi, Grippotyphosa составил 1 : 400, а с лептоспирами серогрупп Canicola и Icterohaemorrhagiae - 1 : 100.
Пример 6.
Способ осуществляли аналогично примеру 1, но поливалентный инактивированный
лептоспирозный антиген, иммуномодулятор, стабилизатор и масляный адъювант смешивали в соотношении 14 : 3 : 23 : 60.
Титр антител в сыворотке крови кроликов с лептоспирами серогрупп Pomona, Tarassovi составил 1 : 400, с лептоспирами серогрупп Canicola и Icterohaemorrhagiae - 1 : 100, а с
лептоспирами серогруппы Grippotyphosa составил 1 : 200.
В ходе проведенной экспериментальной работы нами установлено, что снижение содержания в составе вакцины лептоспирозного антигена, снижение или повышение иммуномодулятора и стабилизатора способствует снижению активности вакцины.
Повышение содержания лептоспирозного антигена в составе вакцины более 15 % не
способствует повышению активности вакцины, но приводит к ее удорожанию.
Источники информации:
1. Панин А.Н., Малахов Ю.А., Соболева Г.Л., Ситьков В.И., Сурмило А.П. Вакцина
против лептоспироза животных лиофилизированная // Ветеринария. - 2002. - № 1. - С. 2124.
2. Ситьков В.И. Научные и практические основы промышленного производства и
применения вакцин: Дисс.... д-ра вет. наук. - М., 1997. - 58 с.
3. Ветеринарные препараты: Справочник / Сост. Ю.Ф.Борисевич, Л.В.Кириллов / Под
ред. Д.Ф.Осидзе. - М.: Колос, 1981. - С. 201-211.
4. Патент России 2030915, 1990.
5. Сусский Е.В. Вакцина против лептоспироза животных концентрированная: Автореф. дис.... канд. вет. наук. - М., 1997. - 20 с.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
5
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
92 Кб
Теги
13452, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа