close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY 14715

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(46) 2011.08.30
(12)
(51) МПК
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
G 01N 33/53
A 61B 5/00
(2006.01)
(2006.01)
СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ РАЗВИТИЯ ТЯЖЕЛОГО
НЕВРОЛОГИЧЕСКОГО НАРУШЕНИЯ У РЕБЕНКА
С ПОСТГИПОКСИЧЕСКИМ ПЕРИНАТАЛЬНЫМ ПОРАЖЕНИЕМ
ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ НА ПЕРВОМ ГОДУ ЖИЗНИ
(21) Номер заявки: a 20090823
(22) 2009.06.04
(43) 2011.02.28
(71) Заявитель: Государственное учреждение "Республиканский научно-практический центр "Мать и дитя" (BY)
(72) Авторы: Мордовина Татьяна Григорьевна; Вильчук Константин Устинович; Перковская Алла Федоровна
(BY)
BY 14715 C1 2011.08.30
BY (11) 14715
(13) C1
(19)
(73) Патентообладатель: Государственное
учреждение "Республиканский научно-практический центр "Мать и дитя"
(BY)
(56) RU 2286575 C1, 2006.
SU 1416917 A1, 1988.
RU 2121682 C1, 1998.
RU 2192779 C2, 2002.
RU 2245675 C2, 2005.
(57)
Способ прогнозирования развития тяжелого неврологического нарушения у ребенка с
постгипоксическим перинатальным поражением центральной нервной системы на первом
году жизни, отличающийся тем, что в крови ребенка в возрасте 3-6 месяцев определяют
уровни лимфоцитов с поверхностными антигенами CD3 + CD4 +, CD3 + CD8 +, CD3 CD8 +, CD3 + CD56 +, CD3 - CD56 +, CD3 + HLADR +, CD3 - HLADR +, CD3 + CD25 + и
CD3 - CD25 +, а также уровни антител к белкам нервной ткани S100, GFAP, основному
белку миелина и фактору роста нервов и при повышенном уровне лимфоцитов с поверхностными антигенами CD3 - CD8 +, CD3 + CD56 +, CD3 - CD56 +, CD3 + HLADR +, CD3 HLADR +, CD3 + CD25 +, CD3 - CD25 +, пониженном уровне лимфоцитов с поверхностными антигенами CD3 + CD4 + и CD3 + CD8 + и уровне 124,25 У.Е. или выше по меньшей мере у двух из указанных выше антител прогнозируют развитие тяжелого
неврологического нарушения.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и может быть использовано
для прогнозирования развития тяжелых неврологических нарушений у детей первого года
жизни с постгипоксическим перинатальным поражением центральной нервной системы
(ЦНС).
Актуальность разработки способа прогнозирования тяжелой неврологической патологии у детей первого года жизни, перенесших перинатальное постгипоксическое поражение мозга, на основании иммунологического обследования продиктована следующим.
Согласно последним данным, в основе хронизации нейродегенеративного процесса, который определяет течение и исход перинатального поражения нервной системы, лежит повышенная аутоиммунная реакция организма к структурам собственной нервной ткани
[Чехонин В.П. - М.: Медицина, 2000. - С. 32; Полетаев А.Б. Нейроиммунология. - 2003. -
BY 14715 C1 2011.08.30
С. 11-17]. Оценить активность аутоиммунного процесса и механизмы, контролирующие
его течение, возможно благодаря комплексному иммунологическому обследованию,
включающему определение идиотипических (АТ1) и антиидиотипических (АТ2) аутоантител к белкам нервной ткани в сыворотке крови, а также фенотипирование субпопуляционного состава лимфоцитов в периферической крови. К тому же по изменению уровня
специфических аутоантител можно диагностировать и прогнозировать заболевание еще на
ранних стадиях. Это обусловлено тем, что еще задолго до клинической манифестации любой болезни в тех или иных клетках начинаются долговременные или перманентные патохимические изменения, неизбежно сопровождающиеся изменениями со стороны
синтеза тех или иных антигенов в специализированных клетках органа. Стойкие сдвиги в
продукции аутоантигенов ведут к долговременным изменениям продукции сывороточного
содержания соответствующих аутоантител, специфически связывающихся с данными антигенами. Определение аутоантител к белкам нервной ткани S100, GFAP, ОБМ, ФРН дает
возможность судить о целостности соответствующих структур мозга, структурными компонентами коих являются указанные нейробелки [Полетаев А.Б. Клиническая и лабораторная иммунология. - М., 2007, 180 с.].
Манифестация неврологической патологии у части детей, перенесших перинатальное
поражение ЦНС, происходит не при рождении, а в последующие месяцы жизни, что ведет
к позднему назначению патогенетической терапии и значительно осложняет течение восстановительного периода [Барашнев Ю. Росс. вестник перинатологии и педиатрии. - 1998. № 4. - С. 6-12; Пальчик А.Б. - СПб., 2000. - С. 47]. В ряде случаев исход заболевания, в том
числе и неблагоприятный, становится очевидным лишь к 9-12 месяцам жизни. При этом
клиническая симптоматика не всегда отражает истинную тяжесть состояния, степень поражения ЦНС и дальнейший прогноз развития ребенка [Бочанцев С.В. Автореф. дис....
канд. мед. наук: 01.00.14. Омская гос. мед. акад., 2000. - 25 с.].
Известен способ прогнозирования нарушений здоровья детей с перинатальными повреждениями ЦНС на первом году жизни [RU 2121682, 1998]. Исследуют пуповинную
кровь ребенка, при этом определяют относительное содержание теофиллинчувствительных клеток и при их содержании 9 % и более прогнозируют сохранение неврологической
симптоматики к концу первого года жизни. Способ позволяет уменьшить объем инвалидизирующих последствий и избежать излишних медикаментозных воздействий при благоприятном прогнозе. Способ имеет следующие недостатки: исследование относительного содержания теофиллинчувствительных клеток не отражает степень повреждения
нервной ткани, что в свою очередь не позволяет прогнозировать тяжесть течения патологического процесса в нервной ткани.
Известен способ определения состояния новорожденного [SU 1416917 A1, 1988], который предусматривает непосредственно после рождения определение содержания малонового диальдегида в плазме крови, взятой из пульсирующей артерии и вен пуповины, с
последующим вычислением отношения первого показателя ко второму, и при величине
1,0-1,3 констатируют удовлетворительное состояние, 1,4-1,6 - состояние с высоким перинатальным риском, 1,7 и более - тяжелое. Однако этот способ имеет ряд недостатков: необходим двухкратный забор крови (из артерии и вены); артериовенозная разница зависит
от большого числа параметров, которые трудно учесть, кроме того, показатели ПОЛ изменяются при большом спектре патологических состояний, что делает метод менее точным и специфичным; создание специальных условий и временных затрат.
Наиболее близким, принятым за прототип, является способ прогнозирования течения
неврологических расстройств у детей раннего возраста с перинатальным поражением
ЦНС [RU 2286575 C1, 2006] путем исследования крови. С этой целью в сыворотке крови
новорожденного определяют уровень нейроспецифического белка (НСБ) - нейроспецифическая енолаза и гомокарнозин, и рассчитывают прогностический коэффициент: Р =
0,328×ГК + 0,0004×НСЕ2 - 0,41×НСЕ + 0,604, где НСЕ - нейроспецифическая енолаза (в
2
BY 14715 C1 2011.08.30
нг/м), ГК - гомокарнозин (в нмоль/м). Если величина рассчитанного коэффициента меньше 0,54, то прогнозируют благоприятное течение заболевания на фоне стандартной базисной терапии с исчезновением неврологической симптоматики к концу первого года
жизни. Если рассчитанный коэффициент будет больше 0,54, прогнозируют неблагоприятное течение заболевания.
Однако этот способ имеет недостатки: в сыворотке крови определяется уровень только одного НСБ, что не в полной мере может отразить поражение различных структурных
элементов нервной ткани. К тому же уровень НСБ в сыворотке крови у новорожденного
отражает только острую фазу нейродегенеративного процесса.
Задачей изобретения является разработка способа, позволяющего с точностью не ниже
72 % прогнозировать формирование тяжелой патологии ЦНС у детей первого года жизни
с постгипоксическим перинатальным поражением ЦНС.
Поставленная задача достигается в способе прогнозирования развития тяжелых
неврологических нарушений у детей первого года жизни с постгипоксическим перинатальным поражением центральной нервной системы путем исследования крови, при этом
в венозной крови ребенка 3-6 месяцев определяют уровень лимфоцитов с поверхностными
антигенами CD3 + CD4 + , CD3 + CD8 + , CD3 - CD8 + , CD3 + CD56 + , CD3 - CD56 + ,
CD3 + HLADR + , CD3 - HLADR + , CD3 + CD25 + , CD3 - CD25 + , в сыворотке крови
определяют содержание идиотипических и антиидиотипических антител к белкам
нервной ткани S100, GFAP, ОБМ, ФРН и при повышенном содержании лимфоцитов
CD3 - CD8 + , CD3 + CD56 + , CD3 - CD56 + , CD3 + HLADR + , CD3 - HLADR + ,
CD3 + CD25 + , CD3 - CD25 + и пониженном CD3 + CD4 + , CD3 + CD8 + , уровне по
меньшей мере двух типов антител 124,25 У.Е. и выше прогнозируют формирование тяжелых неврологических нарушений.
Авторами доказано, что в основе хронизации нейродегенеративного процесса у детей
первого года жизни, индуцированного перинатальной гипоксией-ишемией, лежит повышенная аутоиммунная реакция организма к структурным компонентам нервной ткани на
фоне недостаточности Т-клеточного звена иммунитета. Предлагаемые иммунологические
исследования позволяют оценить аутоиммунную реакцию организма против компонентов
собственной нервной ткани, а также дать характеристику состояния Т-клеточного звена
иммунитета.
Новизна заявляемого способа заключается в том, что авторы впервые предлагают прогнозировать формирование тяжелых последствий перинатального поражения ЦНС гипоксически-ишемического генеза по уровню лимфоцитов с фенотипом CD3 + CD4 + ,
CD3 + CD8, CD3 - CD8 + , CD3 + CD56 + , CD3 - CD56 + , CD3 + HLADR + , CD3 HLADR + , CD3 + CD25 + , CD3 - CD25 + и содержанию аутоантител к S100, GFAP, ОБМ,
ФРН.
Способ осуществляют следующим образом. У ребенка 3-6 месяцев с постгипоксическим поражением ЦНС берут 1 мл венозной крови для исследования. Для фенотипирования субпопуляционного состава лимфоцитов методом проточной цитометрии требуется
свежая (24 часа) венозная кровь с солью EDTA в качестве антикоагулянта. В пробирки для
анализа клинических образцов добавляют конъюгат антител, затем добавляют по 100 мкл
цельной венозной крови и перемешивают на вортексе. Инкубируют в течение 15-20 минут
при комнатной температуре + 18-25 °С в защищенном от света месте. Добавляют лизирующий раствор и перемешивают в вортексе в течение 1 секунды, снова инкубируют 10 минут и добавляют 2 мл буферного раствора. Подсчет результатов проводят на проточном
цитометре.
Для определения уровня аутоантител к белкам нервной ткани методом ИФА использовали тест-систему ИФА-НЕЙРО-АТ с набором S100, GFAP, ОБМ, ФРН антигенов [Морозов С.Г., Гнеденко Б.Б., 2004].
3
BY 14715 C1 2011.08.30
В лунки планшета, на поверхности которых сорбированы соответствующие антигены,
добавляют разведенную контрольную сыворотку и анализируемые пробы сыворотки крови. После инкубации в течение 14-16 часов при температуре + 2-8 °С содержимое лунок
удаляют и вносят в них раствор конъюгата кроличьих антител к IgG человека с пероксидазой хрена. На связанных антителах происходит сорбция молекул конъюгата в количестве, прямо пропорциональном количеству связавшихся антител. После удаления избытка
несвязанного конъюгата проводят ферментативную реакцию для определения активности
пероксидазы, входящей в состав конъюгата. Регистрацию результатов (оптическая плотность раствора в лунке) цветовой ИФА-реакции осуществляют с помощью фотометра вертикального сканирования при длине волны 450 нм в течение 5-10 минут после остановки
реакции.
На основании результатов исследования группы здоровых детей первого года жизни, а
также детей с постгипоксической перинатальной патологией ЦНС различной степени выраженности получено значение уровня АТ для всех исследуемых белков нервной ткани,
равное 124,25 У.Е. При этом значении чувствительность теста равнялась 72 % - при тяжелой патологии ЦНС и 16 % - при незначительных неврологических нарушениях. Специфичность теста составила 96,6 %. Таким образом, оптимальный порог классификации
нормальных показателей от патологических, обеспечивающий максимум чувствительности и специфичности теста, - это значение 124,25. Если уровни хотя бы двух видов определяемых АТ превышают соответствующее максимальное значение 124,25 У.Е., то
следует считать, что имеется повышенная аутоиммунная реакция организма к структурным компонентам собственной нервной ткани, что представляет высокий риск для формирования тяжелой патологии ЦНС.
Предлагаемый способ иллюстрируется примерами.
Пример 1.
Ребенок К-й. Родился 31.12.06 (ист. болезни № 81) у женщины 20 лет от 1 беременности, протекавшей на фоне хронических очагов инфекции, осложненной фетоплацентарной
недостаточностью, угрозой прерывания, от 1 родов в удовлетворительном состоянии, массой 2280 г, оценка по шкале Апгар 7/8 баллов. С рождения у ребенка отмечаются неврологические нарушения. Ребенок осмотрен неврологом. Диагноз: перинатальное поражение
ЦНС средней степени тяжести гипоксически-ишемического генеза, гипертензионный
синдром.
В возрасте 5 месяцев у ребенка взята кровь для иммунологического исследования, выявлено: снижение CD3 + CD4 + , CD3 + CD8 + ; повышение CD3 - CD8 + , CD3 + CD56 + ,
CD3 - CD56 + , CD3 + HLADR + , CD3 - CD25 + . Уровень АТ к ОБМ - 129 У.Е., АТ к ФРН 250 У.Е. Полученные показатели уровня АТ свидетельствуют о повышенной аутоиммунной реакции организма к структурам собственной нервной ткани. Сниженное содержание
основных регуляторных клеток CD3 + CD4 + , CD3 + CD8 + говорит о недостаточности
Т-клеточного звена, осуществляющего контроль за аутоиммунными процессами. Таким
образом, данный ребенок имеет высокий риск формирования тяжелой неврологической
патологии.
В возрасте 12 месяцев жизни ребенок консультирован неврологом. Диагноз: Детский
церебральный паралич, спастический тетрапарез, выраженная задержка психического и
речевого развития.
Пример 2.
Ребенок Б-нь. Родился 07.09.07 (ист. болезни № 244) у женщины 26 лет от 1 беременности, протекавшей с угрозой прерывания, от 1 родов в удовлетворительном состоянии,
массой 3240 г, оценка по шкале Апгар 8/8 баллов. С рождения у ребенка отмечаются
неврологические нарушения. Ребенок осмотрен неврологом. Диагноз: перинатальное поражение ЦНС средней степени тяжести гипоксически-ишемического генеза, гипертензионный синдром.
4
BY 14715 C1 2011.08.30
В возрасте 4 месяцев у ребенка взята кровь для иммунологического исследования, выявлено: показатели клеточного состава лимфоцитов в пределах нормы. Уровень АТ к белкам нервной ткани не превышает 124,25 У.Е. Данный ребенок не имеет риска развития
тяжелой неврологической патологии.
В возрасте 12 месяцев жизни ребенок консультирован неврологом. Диагноз: Здоров.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.
5
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
95 Кб
Теги
патент, 14715
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа