close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY 03549

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
BY (11) 3549
(13)
C1
(51)
(12)
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ
КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ
(54)
(19)
6
A 61K 39/02,
A 61K 39/05,
A 61K 39/08,
A 61K 39/10,
A 61K 39/116
КОМБИНИРОВАННАЯ ВАКЦИНА, СПОСОБ ОДНОВРЕМЕННОЙ
КОМБИНИРОВАННОЙ ВАКЦИНАЦИИ И СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ
ИММУНОГЕННОСТИ
(21) Номер заявки: 1374
(22) 1993.11.26
(60) 93048161, 1993.10.22
(31) 07/966.995
(32) 1992.10.27
(33) US
(46) 2000.09.30
(71) Заявитель: Американ Цианамид Компани (US)
(72) Авторы: Питер Р. Парадизо, Дебора А.
Хогерман, Дейс Вицепс Мадоре, Джилл Дж.
Хэкелл (US)
(73) Патентообладатель: Американ
Цианамид
Компани (US)
(57)
1. Комбинированная вакцина на основе смеси дифтерийного, столбнячного и коклюшного антигенов с капсульным полисахаридным антигеном Haemophilus influenzae типа b, в фармацевтически приемлемом водном
носителе, отличающаяся тем, что она содержит капсульный полисахаридный антиген в виде конъюгата с белком CRM197, при этом компоненты вакцины берут в количествах, обеспечивающих повышенное образование
антител к каждому из антигенов.
2. Комбинированная вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве дифтерийного и столбнячного
антигенов она содержит соответствующие анатоксины, а в качестве коклюшного антигена - инактивированные клетки Bordetella pertussis.
3. Комбинированная вакцина по п. 2, отличающаяся тем, что она содержит дифтерийный и столбнячный
анатоксины, адсорбированные на фосфате алюминия, а инактивированные клетки Bordetella pertussis в виде
суспензии с первичным кислым фосфатом калия, вторичным кислым фосфатом натрия и хлоридом натрия.
4. Способ одновременной комбинированной вакцинации, предусматривающий введение комбинированной вакцины, отличающийся тем, что вводят вакцину по п. 1.
5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что вводят вакцину по п. 2.
6. Способ по п. 4, отличающийся тем, что вводят вакцину по п. 3.
7. Способ по п. 4, отличающийся тем, что вакцину вводят внутримышечно.
8. Способ повышения иммуногенности Haemophilus influenzae типа b, дифтерийного антигена, столбнячного антигена и коклюшного антигена - компонентов комбинированной вакцины, отличающийся тем, что
вводят разовую дозу комбинированной вакцины по п. 1.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что дифтерийный антиген является дифтерийным анатоксином,
столбнячный антиген является столбнячным анатоксином и коклюшный антиген является инактивированными клетками Bordetella pertussis.
10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что дифтерийный анатоксин адсорбирован на фосфате алюминия, столбнячный анатоксин адсорбирован на фосфате алюминия и инактивированные клетки Bordetella
pertussis суспендированы в растворе, содержащем первичный кислый фосфат калия, вторичный кислый
фосфат натрия и хлорид натрия.
11. Способ по п. 8, отличающийся тем, что вакцину вводят внутримышечно.
(56)
1. EP 0101562 A2, 1984.
2. EP 0220387 A2, 1987.
3. US 4673574, 1987.
4. US 4578270, 1986.
BY 3549 C1
5. GB 2007244 A, 1979.
6. US 4761283, 1988.
Изобретение относится к области медицины, а именно к комбинированной педиатрической вакцине,
включающей дифтерийный антиген, столбнячный антиген, коклюшный антиген и конъюгат фрагментов капсульного полисахаридного антигена Haemophilus influenzae типа b (Hib) и дифтерийного белка CRM197
(CRM197) в одной иммунизирующей дозе. Изобретение также относится к способам одновременной комбинированной вакцинации и усиления иммуногенности каждого вакцинного компонента в комбинированной
вакцине.
Оптимальным возрастом для вакцинации против многих заболеваний является период младенчества и
раннего детства. Обычно поэтому во время этого периода назначаются многочисленные прививки в течение
короткого отрезка времени. Одновременное введение может снизить затраты, связанные с введением вакцины, увеличить темпы вакцинации и дать возможность ранней и широкоохватной иммунизации детей.
Примерами вакцинных комбинаций, используемых для вакцинации детей, являются дифтерийный и
столбнячный анатоксины с убитыми целыми клетками Bordetella pertussis (DTP) или с бесклеточными коклюшными антигенами; комбинация живых вакцин кори, эпидемического паротита и краснухи (ММР); трех
полиомиелитных серотипов, или живых (пероральная полиомиелитная вакцина) или неактивированных
(IРУ) и комбинация DTP-IPV.
В настоящее время практика иммунизации требует вакцинации младенцев раннего возраста, начиная с
двухмесячного возраста, как (1) дифтерийным и столбнячным анатоксином и коклюшной (DTP) вакциной,
так и (2) вакциной конъюгата Haemophilus influenzae типа b. Двумя такими коммерчески доступными вакцинами являются Тri Immunol® (Lederle Laboratories) и HibTITER® (Praxis Biologics, Inc.). Обе эти вакцины рекомендованы для введения в двух-, четырех- и шестимесячном возрасте, с активной иммунизирующей дозой
в 15-18 месяцев. Дополнительная доза DTP рекомендуется в 4-6-летнем возрасте. Обе эти вакцины, вводимые раздельно, обеспечили заметный успех в снижении частоты заболеваемости.
В то же время было бы желательно объединить в одну вакцину DTP и конъюгат Haemophilus influenzae
типа b, чтобы снизить число иммунизаций, которые должен получить ребенок, причем такая комбинация
должна иметь приемлемые показатели безвредности и защитной иммуногенности, которые не должны быть
меньше, чем у вакцин вводимых отдельно.
Комбинированная вакцина на основе смеси дифтерийного, столбнячного и коклюшного антигенов с капсульным полисахаридным антигеном Haemophilus influenzae типа b, в фармацевтически приемлемом водном
носителе, согласно изобретению, содержит капсульный полисахаридный антиген в виде конъюгата с белком
CRM197, при этом компоненты вакцины берут в количествах, обеспечивающих повышенное образование антител к каждому из антигенов.
В качестве дифтерийного и столбнячного антигенов вакцина содержит соответствующие анатоксины, а в
качестве коклюшного антигена - инактивированные клетки Bordetella pertussis.
В частности, вакцина содержит дифтерийный и столбнячный анатоксины, адсорбированные на фосфате
алюминия, а инактивированные клетки Bordetella pertussis в виде суспензии с первичным кислым фосфатом
калия, вторичным кислым фосфатом натрия и хлоридом натрия.
Согласно изобретению, предложен способ одновременной комбинированной вакцинации, предусматривающий введение указанной комбинированной вакцины внутримышечно, а также способ повышения иммуногенности Haemophilus influenzae типа b, дифтерийного антигена, столбнячного антигена и коклюшного антигена - компонентов комбинированной вакцины - путем введения разовой дозы комбинированной вакцины.
Дифтерийный антиген является дифтерийным анатоксином, столбнячный антиген является столбнячным
анатоксином и коклюшный антиген является инактивированными клетками Bordetella pertussis.
Дифтерийный анатоксин адсорбирован на фосфате алюминия, столбнячный анатоксин адсорбирован на
фосфате алюминия и инактивированные клетки Bordetella pertussis суспендированы в растворе, содержащем
первичный кислый фосфат калия, вторичный кислый фосфат натрия и хлорид натрия.
Комбинированная педиатрическая вакцина настоящего изобретения содержит дифтерийный, столбнячный и коклюшный антигены, смешанные с конъюгатом фрагментов капсульных полисахаридов Haemophilus
influenzae типа b, ковалентно связанных с CRM197. При предпочтительном осуществлении дифтерийный антиген является дифтерийным анатоксином, адсорбированным фосфатом алюминия, и столбнячный антиген
является столбнячным анатоксином, адсорбированным фосфатом алюминия. Эти анатоксины могут быть
получены хорошо известными в данной области способами. Дифтерийный анатоксин и столбнячный анатоксин получают из Corynebacterium diphtheriae и Clostridiun tetani соответственно, которые выращиваются в
среде по методу Мюллера - Миллера, J.Immunol, 1941, 40:21-32 и J.Immunol, 1947, 56:143-147, и детоксифицируют с помощью формальдегида. Анатоксины очищаются по методу спиртового фракционирования Пиллемера., J.Immunol, 1946, 54:213-224 и разводятся водным раствором, содержащим одноосновной фосфат
натрия, двуосновной фосфат натрия, глицин и тимерозал (ртутное производное) в качестве консерванта.
2
BY 3549 C1
Коклюшный антиген является предпочтительно препаратом целых инактивированных клеток одного
штамма или комбинации штаммов Bordetella pertussis. Инактивированный препарат целых коклюшных клеток получают путем выращивания Bordetella pertussis фазы 1 в модифицированном бульоне Cohen-Wheeler,
содержащем кислотный гидролизат казеина. Bordetella pertussis инактивируется тимеросалом, отделяется и
затем суспендируется в водном растворе, содержащем моноосновной фосфат калия, двухосновной фосфат
натрия, хлорид натрия и тимеросал (ртутное производное) в качестве консерванта.
Компоненты DTP могут быть представлены в виде смеси. Например, коммерчески доступный препарат
DTP, такой, как поставляемый Lederle Laboratories под названием Tri-Immunol® может быть использован для
композиции комбинированной вакцины настоящего изобретения. Конъюгатный компонент Hib комбинированной вакцины настоящего изобретения содержит фрагменты бактериального капсульного полисахарида
Haemophilus influenzae типа b, ковалентно связанные с белком CRM197. Фрагменты получают путем постепенного расщепления очищенного капсульного полисахарида, выделенного из Haemophilus influenzae типа b
выращенной в химически определенной среде. Белок CRM197 является нетоксичным вариантом дифтерийного токсина, выделенного из культур С. diptheriae штамма С7 (бета 197), выращенных в среде на основе казаминокислот и дрожжевого экстракта, фрагменты Haemophilus influenzae типа b соединяли с белком CRM197
путем ковалентного связывания. Особенно предпочтителен способ ковалентного связывания сахарида с белком - восстановительное аминирование. Получение конъюгатов Haemophilus influenzae типа b и СRМ197 путем восстановительного аминирования описано в патентах [3], [6] и 4 902 506. Конъюгат очищают путем
диафильтрации, чтобы удалить непрореагировавший белок или полисахаридные фрагменты и реагенты, и
стерилизуют фильтрованием. Коммерчески доступный конъюгат Haemophilus influenzae типа b, такой, как
поставляемый Praxis Biologics, Inc., под названием HibTITER, может быть использован для композиции комбинированной вакцины настоящего изобретения.
Комбинированная вакцина настоящего изобретения получается путем добавления концентрата конъюгата
Haemophilus influenzae типа b к препарату DTP, когда вакцина DTP разбавляется доведением до окончательного объема. Окончательная иммунизирующая доза поэтому остается в объеме 0,5 мл. Каждая единичная
доза в 0,5 мл комбинированной вакцины составляется так, что она содержит минимум 7,5 Lf дифтерийного
анатоксина, 5 Lf столбнячного анатоксина (оба анатоксина индуцируют образование не менее чем 2 единиц
антитоксина на мл при определении эффективности на морских свинках), 10 мкг очищенного сахарида Haemophilus influenzae типа b и примерно 25 мкг белка CRM197. Каждая доза вакцины составляется так, чтобы
содержать менее 16 OPU инактивированных коклюшных клеток. Общая иммунизирующая доза (первые три
вводимые дозы по 0,5 мл) для людей содержит по оценке 12 единиц коклюшной вакцины с оценкой в 4 защитных единицы на одну человеческую дозу. Каждый компонент вакцины - дифтерийный анатоксин, столбнячный анатоксин, коклюшный и конъюгат Haemophilus influenzae типа b - удовлетворяет стандартам необходимой активности.
В качестве консерванта добавляется тимеросал (ртутное производное) к комбинированной вакцине до
конечной концентрации 1:10000. Содержание алюминия в дозе окончательного продукта не превышает 0,85
мг на 0,5 мл дозу по результатам определения. Остаточное содержание свободного формальдегида по результатам исследований ≤ 0,02 %.
Комбинированная вакцина, содержащая каждый из четырех вакцинных компонентов (D, Т, Р и конъюгат
Hib) получается в виде водной композиции. После взбалтывания вакцина представляет собой гомогенную
белую суспензию. В комбинированную вакцину могут также включаться подходящие вакцинные адъюванты.
Вакцина вводится внутримышечно.
Четырехкомпонентную комбинированную вакцину получали как описано выше, используя DIP (TriImmunol®, Lederle Laboratories) и конъюгат Hib (HibTITER®, Praxis Biologics).
Повышенная иммуногенность каждого из четырех компонентов в комбинированной вакцине была показана при клинических испытаниях. Изучение безопасности и иммуногенности было проведено у начинающих ходить детей и младенцев при участии многих медцентров. Кроме того, было проведено широкомасштабное исследование безопасности применения комбинированных вакцин у младенцев, чтобы оценить
появление редких побочных явлений на большом числе субъектов.
Для обоих исследований, по безвредности и иммуногенности у детей, начинающих ходить, и младенцев, субъекты для введения или единственной дозы 0,5 мл, или одной из трех последовательных в серии введений четырехкомпонентной вакцины (D, Т, Р и конъюгат Hib объединенные) или дозы 0,5 мл для каждой из DTP и конъюгатной
Hib вакцин, выбранных из одной из трех соответствующих серий DTP и конъюгата Hib, вводимых одновременно в
виде отдельных инъекций (DTP и конъюгат Hib отдельно) в возрасте 18±3 месяца или в примерно 2-, 4-, и 6месячном возрасте, отбирались по методу случайной выборки. Таким образом, субъекты относились по методу
случайной выборки. Таким образом, субъекты относились к одной из шести групп, проходивших курс профилактики. Безвредность при остром воздействии вакцины оценивали по сообщениям родителей о побочных эффектах в
течение 72 ч после каждой иммунизации. Иммуногенность определяли с помощью серологического анализа на антитела к полисахариду Haemophilus influenzae типа b (полисахариду Hib дифтерийных, столбнячных и коклюшных).
3
BY 3549 C1
Протокол каждой стадии анализировали независимо. Первичный анализ данных по безвредности и иммуногенности позволил заключить, что все три последовательных серии четырехкомпонентной комбинированной вакцины были сходны по всем испытанным параметрам и, таким образом, данные объединялись. Это
же наблюдалось и для трех соответствующих серий DTP и конъюгата Hib, которые вводили одновременно в
виде раздельных инъекций.
а. Исследование безвредности и иммуногенности для детей, начинающих ходить.
В протокол исследования у детей, начинающих ходить, были включены общим числом 215 субъектов
(для комбинированной вакцины n=107, для DTP-конъюгат Hib отдельно n=108), отобранные в каждом лечебном учреждении из 4 по методу случайной выборки. Демографические характеристики всех субъектов
были сходными.
Серологический анализ образцов сыворотки до и спустя месяц после иммунизации не выявил различий в
реакции на полисахарид Hib дифтерию или столбняк (табл. 1). Однако антительная реакция на коклюшные
агглютинины была значительно выше в группе, получившей комбинированную вакцину (142, 58), по сравнению с группой, получавшей DTP-конъюгат Hib отдельно (82,44: р=0,013).
б. Исследование безвредности и иммуногенности для младенцев.
В протокол исследования младенцев было включено 378 субъектов (для комбинированной вакцины n=189, для
DTP-конъюгат Hib отдельно n=189) и отобраны по методу случайной выборки в каждом из пяти клинических учреждений. Демографические характеристики всех субъектов были сходными.
Реакция на полисахарид Hib после каждой из трех иммунизаций была выше у субъектов, получавших
комбинированную вакцину (табл. 2). После двух доз среднее геометрическое значение титра (СГТ) в группе
комбинированной вакцинации составила 0,66 мкг/мл по сравнению с 0,34 мкг/мл в группе, получавшей DTP
конъюгат Hib отдельно (р<0,001). Та же самая тенденция наблюдалась после третьей дозы, 6,67 мкг/мл по
сравнению с 4,42 мкг/мл для комбинированной вакцины и DTP-конъюгата Hib отдельных вакцин, соответственно (р=0,034).
Серологическую реакцию на компоненты DTP определяли через месяц после введения третьей дозы, СГТ антител
к дифтерии (0,71 IU/мл против 0,40 IU/мл; р=0,009), столбняка (8,20 против 4,51; р<0,001) и коклюшным агглютининам (51,93 против 23,34; р=0,008) был во всех случаях значительно выше в группе, получавшей комбинированную
вакцину по сравнению с группой, получавшей раздельное введение, соответственно (табл. 2). В случаях дифтерии и
коклюше это различие терялось, если сравнивали отношение реакции к основному титру. Сыворотку субпопуляции
анализировали на антитела к специфическим коклюшным антигенам, коклюшному токсину (КТ), FHA и белку 69К.
Реакция на КТ (85,92 против 17,60; р=0,001) и FHA (2,32 против 0,79; р=0,0001) была значительно выше в группе, получавшей комбинированную вакцину по сравнению с группой, получавшей раздельное введение, соответственно
(табл. 3). Однако никакого различия не наблюдалось для 69К (комбинированная вакцина 66,43 против 41,55; р=0,11
при раздельном введении).
в. Широкомасштабное исследование безвредности и иммуногенности для младенцев в субпопуляциях.
Широкомасштабное исследование безопасности для младенцев было проведено в рамках Kaiser Permanente
Medical Саге program of Nothen California. Это исследование проводилось по плану как со случайной, так и с неслучайной выборкой. Первая выборка позволяла накопить данные по применению комбинированной вакцины у
большого числа субъектов (n=5777). Последняя выборка являлась контролем, при котором безвредность комбинированной вакцины (n=720) могла перспективно сравниваться с безвредностью в группе, получавшей DTPконъюгат Hib (n=691) одновременно в виде отдельных инфекций. Таким образом, 3 дозы комбинированной вакцины (D, Т, Р и конъюгат Hib объединенных) получили всего 6497 субъектов возрастом примерно 2, 4 и 6 месяцев.
Частоту местных и системных явлений определяли в течение 24 ч иммунизации. Редкие проявления, такие, как
припадки, оценивались путем определения числа госпитализаций в течение 60 дней и вызовов скорой помощи на дом
в течение 30 дней иммунизации. Для трех рассмотренных серий местные и системные реакции не встречались закономерно более часто после применения комбинированной вакцины по сравнению с одной DTP. Кроме того, не существует значительного различия для частот побочных явлений, связанных с применением лекарственных средств, наблюдаемых при госпитализации или вызовах скорой помощи. Уровень смертности от синдрома внезапной смерти
младенцев был несколько ниже в группе комбинированной вакцины, чем в контрольной группе.
Антительные реакции на полисахарид Hib дифтерию, столбняк и коклюш определяли через месяц после введения третьей дозы комбинированной вакцины у субпопуляции из 123 субъектов. Полученные значения были сравнимы со значениями, полученными при изучении безопасности и иммуногенности у младенцев с участием многих
медцентров, описанном выше (табл. 4).
г. Серологические методики.
Серологические исследования выполняли с помощью ELISA на антитела к полисахариду Haemophilus influenzae
типа b и столбнячные (в исследованиях у младенцев), путем определения с клетками (Vero (J.Biol Stand. 2:189-201;
J.Biol Stand. 2:203-209) на дифтерийные антитела, по методу летальности мышей (Bull. WHO 43:453-459; Minimum
Reguirements: Tetanus Toxoid Appendix A, June 15, 1953, Pub. Health Serv. NIH; Graig, 1986, Manual of Clinical Laboratory Immunol, pp 408-414 3rd ed).
4
BY 3549 C1
На столбнячные антитела (исследование у детей, начинающих ходить) и путем пробы микроагглютинации (Manelark et а1., 1986, Manual of Clinical Laboratory Immunol, pp 388-394, 3rd ed), на коклюшные антитела.
Как будет ясно из данных клинического изучения, представленных здесь, реакция у младенцев на каждый из вакцинных компонентов была выше в случае комбинированной вакцины, чем при одновременном, но раздельном введении DTP и конъюгата Hib вакцин. Использование такой комбинированной вакцины, таким образом, может вдвое
уменьшить количество прививок, получаемых младенцами, и является поэтому важным шагом в направлении улучшения проведения вакцинации.
Таблица 1
Сравнение образования антител комбинированной и отдельным вакцинам1
Компонент
2
(n )
Конъюгат Hib (мкг/мл)
до
после
Дифтерия (IU/мл)
до
после
Столбняк (ЕД/мл)
до
после
Коклюшные агглютинины (эквивалентное разведение)
до
после
Титр антител (СГТ)
комбинированная
(107)
Отдельные
Значение
(108)
p3
0,21
2,77
0,25
3,19
0,270
0,689
0,12
9,56
0,13
10,79
0,812
0,637
0,60
9,68
0,52
8,60
0,542
0,582
14,20
142,58
11,43
82,44
0,451
0,013
1. Комбинированная четырехкомпонентная (D, Т, Р и конъюгат Нib) вакцина или отдельные (DTPконъюгат Hib) вакцины вводили в возрасте 15-18 месяцев с отбором крови для серологии через месяц.
2. Общее число включенных субъектов.
3. Основано на эффектах в первичной (ковариантно скорректированной) модели, включая: вакцинацию,
медцентр, серию, возраст, исходный уровень антител.
Образование антител при сравнении комбинированной и отдельных вакцинин1
Компонент
(n2)
Конъюгат Hib (мкг/мл)
до
после 3
Дифтерия (IU/мл)
до
после 3
Столбняк (ЕД/мл)
до
после 3
Коклюшные агглютинины (эквивалентное разведение)
до
после 3
Титр антител (СГТ)
комбинированная
(189)
Таблица 2
Отдельные
Значение
(189)
p3
0,09
6,67
0,09
4,42
0,762
0,034
0,04
0,71
0,05
0,40
0,624
0,009
0,45
8,20
0,50
4,51
0,404
0,001
6,53
51,93
4,69
23,34
0,121
0,008
1. Комбинированная четырехкомпонентная (D, Т, Р и конъюгат Hib) вакцина или отдельные (DTP-Hib
конъюгат) вакцины вводили в возрасте 2, 4 и 6 месяцев.
2. Общее число включенных субъектов.
3. Основано на эффектах в первичной (ковариантно скорректированной) модели, включая: вакцинацию,
медцентр, серию, возраст, исходный уровень антител.
5
BY 3549 C1
Таблица 3
Образование антител к трем компонентам коклюшной вакцины в группах, получавших комбинированную и отдельные вакцины
Компонент
Коклюшный токсин
до
после 3
69К
до
после 3
FHA
до
после 3
Титр антител (СГТ1)
комбинированная
(n=52)
Отдельные
Значение
(n=34)
p2
1,09
85,92
1,80
17,60
0,001
6,13
66,43
5,98
41,55
0,11
3,97
2,32
4,73
0,79
0,0001
1. Титры антител представлены в единицах ELISA на мл.
2. Значения р рассчитывали, используя тест Wilcoxon для двух образцов.
Таблица 4
Образование антител к каждому компоненту комбинированной (D,T,P и конъюгат Hib) вакцины
Компонент
Конъюгат Hib (мкг/мл)
Дифтерия (IU/мл)
Столбняк (ЕД/мл)
Коклюшные агглютинины (эквивалентное разведение)
n
123
123
123
123
Титр антител (СГТ)
8,20
0,92
7,52
110,10
1. Титры антител через один месяц после третьей дозы, ни одной сыворотки до иммунизации не было получено.
Государственный патентный комитет Республики Беларусь.
220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.
6
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
178 Кб
Теги
03549, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа