close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Патент BY 04405

код для вставкиСкачать
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
РЕСПУБЛИКА БЕЛАРУСЬ
(19)
BY (11) 4405
(13)
C1
7
(51) C 07D 498/18,
(12)
A 61K 31/435,
A 61P 37/06
НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР
ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ
СОБСТВЕННОСТИ
(54)
40-О-(2-ГИДРОКСИ)ЭТИЛРАПАМИЦИН И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ
КОМПОЗИЦИЯ
(21) Номер заявки: 950403
(22) 1995.04.07
(86) РСТ/ЕР 93/02604, 1993.09.24
(31) 9221220.8
(32) 1992.10.09
(33) GB
(46) 2002.03.30
(71) Заявитель: Новартис АГ (CH)
(72) Авторы: КОТТЕНС,
Силвиан;
СЕДРАНИ,
Рихард (CH)
(73) Патентообладатель: Новартис АГ (CH)
(57)
1. 40-O-(2-гидрокси)этилрапамицин формулы I:
(I) .
BY 4405 C1
2. 40-O-(2-гидрокси)этилрапамицин по п. 1, обладающий иммуносупрессивной активностью.
3. Фармацевтическая композиция, обладающая иммуносупрессивной активностью, содержащая активное
вещество и фармацевтически приемлемый растворитель или носитель, отличающаяся тем, что в качестве
активного вещества она содержит 40-O-(2-гидрокси)этилрапамицин по п. 1 в эффективном количестве.
4. 40-O-(2-гидpoкcи)этилpaпaмицин по п. 1, предназначенный для лечения и профилактики следующих
состояний: отторжение аллотрансплантанта, заболевание "трансплантант против хозяина".
(56)
EP 0470804 A1, 1992.
EP 0429436 A2, 1991.
US 5151413 А, 1992.
US 5120842 A, 1992.
EP 0507556 A1, 1992.
Настоящее изобретение относится к новым алкилированным производным рапамицина и предназначено
для использования как фармацевтическое средство, особенно в качестве иммуносупрессанта.
BY 4405 C1
Рапамицин - это известный макролидный антибиотик [1-3], продуцируемый Streptomyces hygroscopicus,
имеющий структуру, описываемую формулой А:
.
Рапамицин является чрезвычайно сильным иммуносупрессантом, и было показано также, что он обладает
противоопухолевой и антигрибковой активностью. Его применение в качестве фармацевтического препарата
ограничивается, однако, его очень низкой и непостоянной биологической доступностью, а также высокой
токсичностью. Кроме того, рапамицин практически нерастворим, что осложняет технологии приготовления
стабильных галеновых препаратов.
Неожиданно было обнаружено, что заявляемое новое производное рапамицина (Новое Соединение) обладает улучшенными фармакологическими показателями по сравнению с рапамицином, большей стабильностью и биологической доступностью, и облегчает приготовление галеновых препаратов. Новое Соединение
является алкилированным производным рапамицина, имеющим структуру, описываемую формулой 1:
, (I)
в которой R1 является CH2CH2-OH;
R2 - водородом;
R4 - метилом;
X - кислородом и
Y - кислородом.
Предпочтительно О-замещение проводят по С40 по следующему общему способу. Рапамицин подвергают взаимодействию с органическим радикалом, присоединенным к отщепляемой группе (например, RX, где
R является органическим радикалом, например, алкил, желательным в качестве О-заместителя, а Х является
отщепляемой группой, например, ССl3С(NН)O или СF3SО3), в соответствующих реакционных условиях, желательно в кислой или нейтральной среде, например, в присутствии кислоты, такой как трифторметансульфокислота, камфорсульфокислота, р-толуолсульфокислота, или их соответствующих пиридиниевых или замещенных пиридиниевых солей, в случае, когда Х является ССl3С(NН)O, или в присутствии основания,
такого как пиридин, замещенный пиридин, диизопропилэтиламин или пентаметилпиперидин, в случае, когда
Х является СF3SО3.
Новое Соединение наиболее перспективно для применения в следующих случаях.
а) Лечение и профилактика отторжения пересаженных органов и тканей, например, для лечения реципиентов трансплантатов сердца, легких, комбинаций сердце-легкое, печени, почек, панкреатических, кожных
или роговичных трансплантатов. Также они показаны для профилактики заболевания "трансплантат против хозяина", например, после пересадки костного мозга.
2
BY 4405 C1
б) Лечение и профилактика аутоимунного заболевания и воспалительных состояний, в особенности воспалительных состояний с этиологией, включающей аутоимунную компоненту, такую как артрит (например,
ревматоидный артрит, хронический прогрессирующий артрит, деформирующий артрит) и ревматические заболевания. Специфические аутоимунные заболевания, при которых могут быть применены соединения по
изобретению, включают аутоимунные гематологические расстройства (включая, например, гемолитическую
анемию, апластическую анемию, эритроцитарную анемию и идиопатическую тромбоцитопению), системную
красную волчанку, полихондрит, склеродому, гранулематоз Вегенера, дерматомиозит, хронический активный
гепатит, тяжелую псевдопаралитическую миастению, псориаз, синдром Стивена-Джонсона, идиопатическое
спру, болезнь аутоимунного воспаления кишечника (включая, например, неспецифический язвенный колит и
болезнь Крохна), эндокринную офтальмопатию, болезнь Гравеса, саркоидоз, множественный склероз, первичный билиарный цирроз печени, юношеский диабет (сахарный диабет 1-го типа), увеит (предшествующий и последующий), сухой кератоконъюктивит и весенний кератоконъюктивит, интерстициальный фиброз легких, псориатический артрит, гломерулонефрит (с и без нефротического синдрома, например, включая идиопатический
нефротический синдром или нефропатию с минимальными изменениями) и юношеский дерматомиозит.
в) Лечение и предупреждение астмы.
г) Терапия множественной лекарственной устойчивости (МЛУ). Новое Соединение подавляет Ргликопротеины (Ргп), которые являются мембранными транспортными молекулами, ассоциированными с
МЛУ. МЛУ особенно проблематична у раковых больных и больных СПИДом, которые не будут реагировать
на обычную химиотерапию из-за того, что лекарственные препараты выводятся из клеток посредством Ргп.
Новое Соединение полезно поэтому для повышения эффективности других химиотерапевтических средств
при лечении и регуляции состояний множественной лекарственной устойчивости, таких как рак с множественной лекарственной устойчивостью или СПИД с множественной лекарственной устойчивостью.
д) Лечение пролиферативных расстройств, например опухолей, гиперпролиферативных кожных нарушений
и тому подобное.
е) Лечение грибковых инфекций.
ж) Лечение и профилактика воспаления, особенно для усиления действия стероидов.
з) Лечение и профилактика инфекции, особенно инфекции, вызываемой патогенами, обладающими ПМИ
или ПМИ-подобными факторами.
и) Терапия передозировок FK-506, рапамицина, иммуносупрессивного Нового Соединения и других связывающих макрофилин иммуносупрессантов.
Таким образом, изобретение предлагает описанное здесь Новое Соединение для применения в качестве
нового промежуточного продукта либо в качестве фармацевтических препаратов, способы лечения или профилактики вышеописанных расстройств путем введения эффективного количества Нового Соединения пациенту в случае необходимости, использование Нового Соединения для приготовления лекарственных препаратов для лечения и/или профилактики описанных выше расстройств и фармацевтические композиции,
содержащие Новое Соединение в сочетании или ассоциации с фармацевтически приемлемым разбавителем
или носителем.
Описанное Новое Соединение является сильным иммуносупрессантами и особенно перспективны для
применения по показаниям а) и б).
Новые Соединения применяют путем введения фармацевтически эффективной дозы в фармацевтически
приемлемой форме пациенту, нуждающемуся в лечении. Соответствующая доза Нового Соединения может
меняться, например, в зависимости от состояния, которое собираются лечить (например, от типа заболевания или природы устойчивости), желаемого эффекта и способа введения.
В целом успешные результаты получают при пероральном введении в дозах порядка от 0,05 до 5 или до
10 мг/кг/день; например, порядка 0,1 до 2 или до 7,5 мг/кг/день при однократном введении, или раздельными
дозами - от 2 до 4-х в день, парентеральном введении, в частности, внутривенно, например, путем капельного внутривенного введения или вливания, в дозах порядка от 0,01 до 2,5 или до 5 мг/кг/день, например, от
0,05 или 0,1 до 1,0 мг/кг/день. Рекомендуемыми дневными дозами для пациентов являются дозы порядка 500
мг перорально, например порядка 5 до 100 мг перорально, или порядка от 0,5 до 125 и до 250 мг внутривенно, например порядка от 2,5 до 50 мг внутривенно.
Другим возможным и даже более предпочтительным вариантом является систематизация дозирования
для пациента специфическим образом так, чтобы обеспечить предварительно определенные уровни в крови,
например, как определено RIA методикой. Так, например, дозирование пациенту может быть отрегулировано таким образом, чтобы текущий уровень лекарства в крови, согласно измерениям с помощью RIA, составлял регулярно порядка от 50 или 150 до 500 или 1000 нг/мл, например, аналогично способам дозирования,
применяемым в настоящее время в циклоспориновой иммунносупрессивной терапии.
Новое Соединение может вводиться в виде одного активного ингредиента или совместно с другими лекарственными препаратами. Например, при иммуносупрессивной терапии, такой как профилактика и лечение болезни "трансплантат против хозяина", отторжения трансплантата или аутоимунного заболевания, Новое Соединение может быть использовано в сочетании с Циклоспорином, FK-506 или их иммуносупрессив3
BY 4405 C1
ными производными; кортикостероидами; азатиопреном; иммуносупрессивными моноклональными антителами, например моноклональными антителами к CD3, CD4, CD25, CD28 или CD45, и/или другими иммуномодуляторными соединениями. При противовоспалительной терапии Новое Соединение может применяться
совместно с противовоспалительными средствами, например кортикостероидами. В антиинфекционной терапии Новое Соединение может применяться в сочетании с другими средствами подавления инфекций, например антивирусными препаратами и антибиотиками.
Новое Соединение вводят любым стандартным путем, в частности энтерально, например, перорально, в
виде растворов для питья, таблеток или капсул, или парэнтерально, например, в виде растворов или суспензий для инъекций. Рекомендуемые разовые дозы для перорального введения содержат, например, от 1 до 50
мг соединения по изобретению, обычно от 1 до 10 мг. Фармацевтические композиции, содержащие Новое
Соединение, могут быть приготовлены аналогично фармацевтическим композициям, содержащим рапамицин [4], что очевидно для специалиста в этой области.
Фармакологическую активность Нового Соединения демонстрируют следующие тесты.
1. Смешанная лимфоцитарная реакция (СЛР).
Смешанная Лимфоцитарная Реакция первоначально была разработана в применении к аллотрансплантатам, для оценки тканевой совместимости между потенциальными донорами и реципиентами органов, и является одной из лучших существующих моделей имунной реакции in vitro. Например, описанную [5,6] муриновую модель СЛР используют для демонстрации иммуносупрессивного действия Нового Соединения.
Клетки селезенки (0,5×106) Balb/c мышей (самки, 8-10 недель) коинкубируют в течение 5 дней с 0,5×106 облученных (2000 рад) или обработанных митомицином С клеток селезенки СВА мышей (самки, 8-10 недель).
Облученные аллогенные клетки индуцируют пролиферативный ответ в Balb/c клетках селезенки, который
может быть измерен путем включения в ДНК меченого предшественника. Так как стимуляторные клетки облучены (или обработаны митомицином С), то они не отзываются на Balb/c клетки пролиферацией, но сохраняют
при этом свою антигенность. Антипролиферативное действие Нового Соединения в отношении Balb/c клеток
измеряют в различных разведениях и вычисляют концентрацию, обеспечивающую 50 % ингибирование клеточной пролиферации (ИК50). Ингибирующую способность тестируемого образца можно сравнить с рапамицином и выразить в виде относительной ИК50 (например, ИК50 тестируемого образца/ ИК50 рапамицина).
2. ИЛ-6 опосредованная пролиферация.
Способность Нового Соединения повреждать фактор роста, ассоциированный с сигнальными путями,
оценивают с помощью клеточной линии интерлейкин-6 (ИЛ-6)-зависимой мышиной гибридомы. Анализ
проводят в 96-луночных микротитрационных планшетах. 5000 клеток/на лунку культивируют в бессывороточной среде [7, 8], обогащенной 1 нг рекомбинантного ИЛ-6/мл. После 66 часов инкубации в отсутствии
или присутствии тестируемого образца клетки обрабатывают 1 мкКи (3-Н)-тимидин/лунку в течение следующих 6 часов, их сбор и подсчет осуществляют посредством жидкостной сцинтилляции. Включение (3Н)-тимидина в ДНК коррелирует с возрастанием количества клеток и таким образом является мерой клеточной пролиферации. Серии разведении тестируемого образца позволяют вычислять концентрацию, обеспечивающую 50 % ингибирование клеточной пролиферации (ИК^о)• Ингибирующую способность тестируемого
образца можно сравнить с рапамицином и выразить в виде относительной HKso (например, HKso тестируемого образца/ИКзо рапамицина).
3. Анализ на связывание макрофилина.
Известно, что рапамицин и структурно сходный с ним иммуносупрессант FK-506 связываются in vivo с
макрофилином-12 (известным также как FK-506 связывающийся белок или FKBP-12), и считается, что это
связывание соотносится с иммуносупрессивной активностью этих соединений. Новое Соединение также
сильно связывается с макрофилином-12, как это продемонстрировано в опыте по конкурентному связыванию.
В этом опыте для покрытия микротитрационных лунок используют FK-506, иммобилированный на БСА.
Биотинированный рекомбинантный человеческий макрофилин-12 (биот-МАФ) оставляют для связывания в
присутствии или отсутствии тестируемого образца с иммобилизованным FK-506. После промывания (для удаления неспецифически связанного макрофилина) связанный биот-МАФ определяют путем инкубации с
конъюгатом стрептавидин-щелочная фосфатаза с последующей промывкой и добавлением р-нитрофенилфосфата в качестве субстрата. Измеряют значения ОП при 405 нм. Связывание тестируемого образца с
биот-МАФ приводит к уменьшению количества биот-МАФ, связанного с FK-506, и, таким образом, к
уменьшению ОП 405. Серии разведений тестируемого образца позволяют определить концентрацию, обеспечивающую 50 % ингибирование биот-МАФ связывания с иммобилизованным FK-506 (ИК50). Ингибирующую способность тестируемого образца сравнивают с ИК50 свободного FK-506 в качестве стандарта и
выражают в виде относительной ИК50 (например, ИК50 тестируемого образца/ ИК50 свободного FK-506).
4. Локализированная реакция "Трансплантат против хозяина" (ТпХ).
Эффективность Нового Соединения in vivo изучают на подходящей животной модели [9]. Клетки селезенки (1×107) от 6-недельных самок Wistar/Furth (WF) крыс вводят подкожно на 0-ые сутки в левую заднюю лапу самок (F344 × WF)F1 крыс с весом около 100 г. Животных обрабатывают в течение следующих 4
4
BY 4405 C1
дней и на 7-е сутки удаляют и взвешивают подколенные лимфатические узлы. Разницу в весе между двумя
лимфатическими узлами используют в качестве параметра для оценки реакции.
5. Почечная аллотрансплантатная реакция у крысы.
Одну почку от самки fisher 344 крысы пересаживают в почечную лоханку однолатерально (левая сторона)
нефрэктомизированного WF крысы-реципиента путем анастомоза "конец в конец". Уретральный анастомоз
также относится к типу "конец в конец". Обработку начинают в день пересадки и продолжают в течение 14
суток. Спустя семь суток проводят нефрэктомию с противоположной стороны, оставляя реципиента на обеспечении донорной почки. Выживание реципиента трансплантата используют в качестве параметра для функционального трансплантата.
6. Экспериментально индуцируемый аллергический энцефаломиелит (ЭАЭ) у крыс.
Эффективность Нового Соединения в отношении ЭАЭ измеряют, например, описанным способом [1012]. ЭАЭ является широко применяемой моделью множественного склероза. Самцов Wistar крыс инъецируют в задние лапы смесью бычьего спинного мозга и полного адъюванта Фройнда. Симптомы заболевания
(паралич хвоста и обеих задних ног) обычно развиваются в течение 16 суток. Регистрируют количество заболевших животных, а также время начала заболевания.
7. Артрит, вызываемый адъювантом Фройнда.
Эффективность против экспериментально вызываемого артрита была продемонстрирована описанным
способом [13, 14]. OFA и Wistar крысам (самцы и самки с весом тела 150 г) вводят внутрикожно в основание
хвоста или в заднюю лапу 0,1 мл минерального масла, содержащего 0,6 мг лиофилизированной убитой теплом Mycobacterium smegmatis. В модели развивающегося артрита лечение начинают немедленно после инъекции адъюванта (1-18 сутки), в модели стабильного артрита лечение начинают на 14-е сутки, когда хорошо
развивается вторичное воспаление (14-20 сутки). В конце эксперимента измеряют с помощью микроциркуля опухание суставов. ЭД50 - это пероральная доза в мг/кг, которая уменьшает опухание (первичное
или вторичное) наполовину по сравнению с контролем.
8. Противоопухолевая и МЛУ активность.
Противоопухолевую активность Нового Соединения и его способность усиливать действие противоопухолевых средств путем ослабления множественной лекарственной устойчивости демонстрируют, например,
путем введения противоракового средства, например колхицина или этопозида, в клетки, обладающие множественной лекарственной устойчивостью, и клетки, чувствительные к лекарственным препаратам, in vitro
или животным, имеющим опухоли или инфекции с множественной лекарственной устойчивостью, с параллельным введением тестируемого Нового Соединения или без него, а также путем введения только одного
Нового Соединения.
Такое тестирование in vitro выполняют, используя любую соответствующую устойчивую к лекарственным
препаратам клеточную линию и контрольную (родительскую) клеточную линию, полученные, например, как
описано [15, 16]. Конкретными выбранными клонами являются линия CHR с множественной лекарственной устойчивостью (например, устойчивостью к колхицину) (субклон C5S3.2) и родительская, чувствительная линия
AUX В1 (субклон АВ1 S11).
In vivo противоопухолевую активность и анти-МЛУ активность демонстрируют, например, на мышах,
инъецированных раковыми клетками с множественной лекарственной устойчивостью и чувствительными к
лекарственным препаратам. Выращивают суб-линии асцитной карциномы Ehrlich'a (ЕА), устойчивые к лекарственным веществам, DR, VC, AM, ЕТ, ТЕ или СС, путем непрерывного переноса ЕА клеток последовательным поколениям BALB/c мышей-хозяев [17].
Эквивалентные результаты могут быть получены с помощью тест-моделей для Нового Соединения со
сравнимой схемой, например, in vitro или с использованием опытных животных, инфицированных устойчивыми к лекарственным препаратам и чувствительными к лекарственным препаратам вирусными штаммами,
антибиотикоустойчивыми (например, к пенициллину) и чувствительными бактериальными штаммами,
штаммами грибков, устойчивыми и чувствительными к анти-микотическим препаратам, а также устойчивыми к лекарственным препаратам штаммами простейших, например штаммами плазмодий, например субштаммами природного происхождения Plasmodium falciparum, обладающими приобретенной устойчивостью
к химиотерапевтическим, анти-малярийным препаратам.
10. Стероидное потенцирование.
Макрофилин-связывающая активность Нового Соединения делает возможным его применение для усиления или потенцирования действия кортикостероидов. Комбинированная обработка соединением по изобретению и кортикостероидом, таким как дексаметазон, приводит к сильному увеличению стероидальной
активности. Это может быть продемонстрировано, например, в опыте с репортерным геном хлорамфениколацетилтрансферазы вируса муриновой опухоли молочной железы (МОМЖВ-ХАТ) [18]. Такой синергический эффект позволяет применять уменьшенные дозы кортикостероидов, уменьшая тем самым возможность
побочного действия в отдельных случаях.
11. Ингибирование ПМИ и ПМИ-подобными факторами.
5
BY 4405 C1
В добавление к вышесказанному, Новое Соединение связывается и блокируют различные потенциаторы
макрофаговой инфективности (ПМИ) и ПМИ-подобные факторы, структурно сходные с макрофилином.
ПМИ и ПМИ-подобные факторы являются факторами вирулентности, производимыми самыми разнообразными патогенами, включая патогены рода Chlamidia, например Chlamidia trachomatis; Neisseria, например
Neisseria meninqitidis, и Legionella, например Legionella pneumophilia, а также облигатными паразитами,
представителями порядка Rickettsiales. Эти факторы играют решающую роль в возникновении внутриклеточной инфекции. Эффективность Нового Соединения в понижении инфективности патогенов, которые производят ПМИ или ПМИ-подобные факторы, может быть продемонстрирована путем сравнения инфективности патогенов в клеточной культуре в присутствии и отсутствии макролидов, например, описанными
способами [19]
Новое Соединение перспективно также для применения в опытах по выявлению присутствия или определению количества макрофилинсвязывающих соединений, например, в сравнительных анализах, в целях диагностики или скрининга. Так, например, изобретение предлагает применять Новое Соединение в качестве
средства скрининга для определения присутствия макрофилинсвязывающих соединений в тестируемом растворе, например крови, кровяной сыворотке или тестируемом бульоне, который должен быть подвергнут
скринингу. Лучше всего, чтобы Новое Соединение было иммобилизовано в микротитрационных лунках, после чего оно может связываться в присутствии и отсутствии тестируемого раствора с меченым макрофилином-12 (FKBP-12). В другом случае FKBP-12 иммобилизован в микротитрационных лунках и оставлен для
связывания в присутствии и отсутствии тестируемого раствора с Новым Соединением, которое было мечено,
например, фторо-, ферментными или радио- метками, например Новое Соединение, О-замещенное по С40
меченой группой. Планшеты промывают и измеряют количество связанного меченого соединения. Количество макрофилинсвязывающего вещества в тестируемом растворе приблизительно обратно пропорционально количеству связанного меченого соединения. Для количественных анализов строят стандартную кривую
связывания, используя известные концентрации связывающего макрофилин соединения.
Пример.
В данном примере для облегчения идентификации приведены характерные спектроскопические данные.
Пики, которые не отличаются существенно от рапамицина, не включены. Биологические характеристики выражены в виде относительной ИК50, сравниваемой с рапамицином в случае анализов смешанной лимфоцитарной
реакции (СЛР) и ИЛ-6-зависимой пролиферации (ИЛ-6-зав. прол.) и сравниваемой с FK-506 при проведении
анализа на связывание макрофилина (АСМ). Более высокий ИK50 коррелирует с более низким свойством связывания.
Пример 1.
40-O-(2-Гидрокси)этил-рапамицин.
а) 40-O-[2-(t-Бутилдиметилсилил)окси]этил-рапамицин.
Раствор 9,14 г (10 ммоль) рапамицина и 4,70 мл (40 ммоль) 2,6-лутидина в 30 мл толуола нагревают до
60 °С и добавляют к нему раствор 6,17 г (20 ммоль) 2-(t-бутилдиметилсилил)оксиэтилтрифлата и 2,35 мл (20
ммоль) 2,6-лутидина в 20 мл толуола. Эту смесь перемешивают в течение 1,5 ч. Затем с интервалом в 1,5 ч
добавляют две порции раствора 3,08 г (10 ммоль) трифлата и 1,2 мл (10 ммоль) 2,6-лутидина в 10 мл толуола. После добавления последней порции перемешивание продолжают при 60 °С в течение 2 ч, а полученную
коричневую суспензию фильтруют. Фильтрат разбавляют этилацетатом и промывают водным бикарбонатом
натрия и рассолом. Органический раствор сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют. Остаток чистят хроматографически на колонке с силикагелем (40:60 гексан - этилацетат), в результате
получают 40-O-[2-(t-бутилдиметилсилил)окси]этил-рапамицин в виде твердого белого вещества: 1Н ЯМР
(СDС13) δ 0,06 (6Н, s), 0,72 (1Н, dd), 0,90 (9Н, s), 1,65 (3H, s), 1,75 (3H, s), 3,02 (1H, m), 3,63 (3H, m), 3,72
(3H, m); MC (FAB) m/e 1094 ([М + Na]+), 1022 ([М-(ОСН3 + Н2O)]+).
б) 40-O-(2-Гидрокси)этил-рапамицин.
К перемешанному, охлажденному (0 °С) раствору 4,5 г (4,2 ммоль) 40-O-[2-(t-бутилдиметилсилил)окси]
этил-рапамицина в 20 мл метанола добавляют 2 мл 1N НС1. Этот раствор перемешивают в течение 2 ч и
нейтрализуют водным бикарбонатом натрия. Смесь экстрагируют тремя порциями этилацетата. Органический раствор промывают водным бикарбонатом натрия и рассолом, сушат над безводным сульфатом натрия,
фильтруют и концентрируют. В результате хроматографической очистки на колонке с силикагелем (этилацетат) получают соединение, указанное в заголовке, в виде твердого белого вещества: 1Н ЯМР (СDС13) δ 0,72
(1Н, dd), 1,65 (3H, s), 1,75 (3H, s), 3,13 (5H, s и m), 3,52 - 3,91 (8H, m); MC (FAB) m/e 980 ([М + Na]+), 926
([M-ОСН3]+), 908 ([М-(ОСН3 + Н2O)]+), 890 ([М-(ОСНз + 2Н2O)]+), 876 ([М-(2СН3ОН-ОН)]+), 858 (М(ОСН3 + СН3ОН + 2Н2O)]+).
АСМ (ОТН. ИК50)
2,2
ИЛ-6 зав. прол. (отн. ИК50)
2,8
СЛР (отн. ИК50)
3,4.
6
BY 4405 C1
Источники информации:
1. McAlpine, J.В., et а1., O. Antibiotics (1991) 44:688.
2. Schreiber, S.L, et al., J. Am. Chem. Soc. (1991) 113:7433.
3. Патент США 3 929 992.
4. EPA 0 041 795.
5. T. Meo, Immunelogical Methods.
6. I. Lefkovits and В. Peris, Eds., Academic Press, N.Y. pp. 227-239 (1979).
7. M.H. Schreier and R. Tees, Immunological Methods
8. I. Lefkovits and B. Pernis, eds., Academic Press 1981, Vol. II, pp. 263-275.
9. Ford et al., TRANSPLANTATION 10 (1970), 258.
10. Levine & Wenk, AMER. J. PATH. 47 (1965) 61.
11. Mc Farlin et al., J. IMMUNOL. 113 (1974) 712.
12. Borel, TRANSPLANT. & CLIN. IMMUNOL. 13 (1981) 3.
13. Winter & NUSS, ARTHRITIS & RHEUMATISM 9 (1966) 394.
14. Billingham & Davies, HANDBOOK OF EXPERIMENTAL PHARMACOL (Vane & Ferreira Eds, SpringerVerlag, Berlin) 50/II (1979) 108-144.
15. Ling et al., J. Cell. Physiol. 83, 103-116 (1974).
16. Bech-Hansen et al., J. Cell. Physiol. 88, 23-32 (1976).
17. Slater et al., J. Clin. Invest, 70, 1131 (1982).
18. Ning, et al., J. Biol. Chem. (1993) 268:6073.
19. Lundemose, et al., Mol. Microbiol. (1993) 7:777.
Национальный центр интеллектуальной собственности.
220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.
7
Документ
Категория
Без категории
Просмотров
0
Размер файла
225 Кб
Теги
04405, патент
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа