close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Презентация

код для вставкиСкачать
Разработка тест-системы на основе ПЦР
для определения и дифференциации
вирусов лейкоза птиц различных
подтипов
Профессор Гребенникова Т. В.
Avian Oncoviruses
Herpesviruses
MDV
Oncogenic
1st serotype
M
V
VV
VV+
Retroviruses
LPDV
???????
REV
ALV
Ekzogenic
Nononcogenic
A
1st serotype
attenuated
MDV
CVI 988/
Rispens
2nd serotype
apathogenic
HVC
SB-1
3d serotype
Antigen closed
FC-126
HVT
B
C
Endogenic
E
J
D
Вирусы лейкоза птиц
Avian leukosis virus (ALV)
Относятся к ретровирусам типа С, вызывающим различные
новообразования, включая миеломы и лимфомы.
Подразделяются на 6 подгрупп А, В, С, D, Е и недавно описанную
подгруппу J.
Диагностика осуществляется определением вирусных
группоспецифических антигенов (ГСА) с помощью ИФА. Такой тест
определяет одновременно ГСА экзогенного и эндогенного
происхождения.
Надежным методом определения экзогенных вирусов является
иммуноферментный анализ после предварительного культивирования
вируса лейкоза на культуре эмбриональных фибробластов.
ПЦР может быть использована для определения вирусной РНК и
провирусной ДНК.
Определение группоспецифических
антигенов вирусов лейкоза птиц в течение
2001-2004 г.
Более 1000 образцов из 17 различных областей РФ
были проанализированы в 2001-2004 г. г.
Группоспецифические антигены вирусов лейкоза птиц
были обнаружены у птицы всех возрастов
Вывод:
Для более подробного изучения вирусов лейкоза птиц
необходимы дополнительные методы диагностики
Разработка ПЦР для определения вирусной РНК
и провирусной ДНК в тканях инфицированных
вирусом лейкоза птиц
Взятие проб
для анализа:
сыворотки крови
образцы тканей
К+
+
+
-
-
Шаг 1: выделение
нуклеиновых кислот
(ДНК и РНК)
- КШаг 2: ОТ-ПЦР
кДНК или ДНК инфекционного
возбудителя
Праймер№1
Шаг 3: учет продуктов амплификации
в гель-электрофорезе
Праймер№2
амплификация
Разработка ПЦР для определения вирусной РНК и
провирусной ДНК в тканях инфицированных
вирусом лейкоза птиц
Специфичность праймеров, используемых для определения
РНК и ДНК вируса лейкоза птиц методом ПЦР
Пара
праймеров
Размер ПЦР-фрагмента
(п.о.)
Специфичность
H5, AD1
314
ALV подгруппы A-D
H5, H7
764
ALV подгруппа J
F5, R5
797-1023
ALV подгруппа J
Alp27F,
Alp27R
738
Универсальные для
всех подгрупп ALV
Авивак,
Smith et al. 1998,
Lupiani et al. 2000,
Пробы возможность выезда
тел в конце
Результаты определения вирусной РНК и провирусной
ДНК в сыворотках крови птиц методом ПЦР
100
ALV A-D
positive
80
60
%
negative
40
ALV J
positive
20
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10 11 12 13 14 15 16 17
# of chicken group
Результаты определения вирусной РНК и провирусной
ДНК вируса лейкоза птиц методом ПЦР
Было проанализировано более 4000 образцов сывороток крови
и более 15 опухолевых органов птицы с использованием 4 пар
праймеров
Обнаружено, что 60-92%птиц содержат нуклеиновые кислоты
вируса лейкоза птиц подгруппы A-D. 2-13% птиц содержат
нуклеиновые кислоты вируса подгруппы J. От 3 до 40% птиц
являются отрицательными по вирусу лейкоза.
Были проанализированы группы птиц мясной породы
различных линий,однако никаких выводов относительно
большей или меньшей восприимчивости той или иной линии к
вирусу лейкоза птиц подгруппы J не обнаружено.
Данная постановка не определяет стадию заболевания, но
положительный результат ПЦР говорит о том, что птица либо
заражена вирусом лейкоза, либо является источником
распространения заболевания
Практические результаты исследования
поголовья птиц на наличие АLV методом ПЦР.
Сформированы 2 группы:
10299 головы,
отрицательные по ALV
12016 голов не
прошедшие
исследование на ALV
В возрасте 245 дней проведен сравнительный анализ двух групп
•На 4,1 я. выше яичная продуктивность
•На 1,8% выше выход инкубационных яиц
•На 1,3% выше процент вывода
•В 3 раза больше сохранность поголовья
•В 1,9 раз ниже случаев заболевания
органов
•Затраты кормов ниже на 0,279 ц. к. е.
Разработка ПЦР для определения вирусной РНК
и провирусной ДНК в тканях инфицированных
вирусом лейкоза птиц
Проведены государственные контрольные испытания тестсистемы
Сделан вывод о возможности ее использования для диагностики
РНК и ДНК вируса лейкоза птиц и дифференцирования подтипов
A-D от подтипа J.
Тест-система рассчитана на проведения 50 анализов с двумя
парами праймеров.
Разработка тест-системы для обнаружения и
дифференциации вируса лейкоза птиц подтипов
A-D и J методом ПЦР.
Набор для выделения
ДНК и РНК
+4оС
Набор для
выявления ДНК и РНК
вируса
-20оС
Набор для
проведения
электрофореза
+4оС
Документ
Категория
Презентации по обществознанию
Просмотров
28
Размер файла
1 034 Кб
Теги
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа