close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Презентация

код для вставкиСкачать
Кроветворение
Профессор кафедры
клинической лабораторной
диагностики ИГИУВа,
д.м.н.Т.С.Белохвостикова
21.09.2014
1
План лекций и элективов
Клеточные цикл, апоптоз 3 ч.
3 ч.
Кроветворение
3 ч.
Гемобластозы
Проточная цитофлуориметрия в онкогематологии.
3 ч.
Лимфопролиферативные заболевания
электив
3 ч.
Электрофоретическая идентификация клональной секреции
тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов
электив
Миелопролиферативные заболевания
3 ч.
Лабораторная диагностика анемий
3 ч.
Лабораторная диагностика лимфом
Феррокинетика
3 ч.
Современные достижения лабораторной диагностики
электив
21.09.2014
электив
2
Кроветворение
Повестка дня
• Современная теория кроветворения
• Структурная организация кроветворной
системы
• Регуляция гемопоэза
• Семейства сигнальных цитокинов
• Возрастные особенности кроветворения
• Функции клеток крови
21.09.2014
3
Словарь
• Хомминг (homing) -способность к миграции клеток, т.е.
возвращаться "домой" в костный мозг
• Рецептор участок поверхности клетки для связи с Аг или
Ат, отличающийся характерной молекулярной структурой и
хемораспознающими свойствами
• Ростовые факторы - группа белковых молекул,
индуцирующих синтезДНК в клетке, ее дифференцировку и
подавляющих пролиферацию.
• Цитокины- группа белковых молекул, способных изменять
фукнкциональной состояние клеток крови
• Интерлейкины- группа цитокинов, использующихся
клетками для межклеточной сигнализации
• Стволовая кроветворная клетка – клетки, способные
восстанавливать гемопоэз после облучения или
токсических воздействий, носят название «стволовых
клеток»
• коммитированные ПСКК (commit-принятие на себя
обязательств) – линейно дифференцированные клетки
• Claster Differentiation – CD - кластер дифференцировки –
совокупность однотипных молекул на поверхности клетки.
Чаще бывает стадиоспецифическим.
21.09.2014
4
• Ростовые
факторы
Кроветворение
Кроветворение (синоним гематопоэз) — процесс,
заключающийся в серии клеточных
дифференцировок, в результате которых
образуются зрелые клетки крови
Клетки
ПСК
К
ИЛ
Кроветворение представляет собой тонко регулируемый
Рецепторы
Факторы
Дифференцир
процесс последовательных
дифференцировок
роста
овка
родоначальных клеток, приводящий к образованию
зрелых клеток крови всех 8 линий:
Интегрины
Деление
КС эритроциты, базофильные,
(миелоидных:
Ф
нейтрофильные и эозинофильные гранулоциты,
мегакариоциты, моноциты-макрофаги, и лимфоидных:
Т- и В- лимфоциты)
21.09.2014
5
П.А. Воробьев и соавт., 2002
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Современные функциональные методы
исследования костного мозга.
КОЕ: Тест колониеобразования в селезенке по Тиллу и Мак-Куллоку (1961, J.E.Till, E.A.McCulloch).
Подсчет числа колоний клеток в селезенках мышей через несколько дней после их введения летально
облученным мышам. Одна колония соответствует одной колониеобразующей единице = одной
плюрипотентной СКК. Тест применяется для количественного определения стволовых клеток в
суспензии.
БОЕ-э: бурстообразующие единицы соответствуют наиболее ранним предшественникам эритропоэза
В конце 60-х годов появились первые экспериментальный доказательства того, что все клетки
крови и соответственно костного мозга произошли из одной клетки предшественницы. Сначала
это было доказано в экспериментах по изучению терапии лучевой болезни на мышах, потом
появились методики изучения стволовых клеток человека in vitro. Трудность была в том что
содержание стволовых клеток в костном мозге составляет 0.05% по сравнению со всей массой
клеток костного мозга; стволовые клетки невозможно было морфологически идентифицировать.
При окраске стволовые клетки не идентифицируются.
В 70 годах были определены методики по изучению мезенхимальных и гемопоэтических
стволовых клеток, что позволило внедрить совершенно иные методы лечения заболеваний,
пересмотреть классификации и др. Основная масса этих клеток находится в покоящемся
состоянии, и в таком состоянии эта клетка напоминает лимфоцит ( не синтезирует ДНК,
ферменты), когда эта клетка в определенных условиях начинается делится она увеличивается в
размерах и напоминает бласт, но содержание этих клеток такое же малое. Клетки сеют на агар, и
через 7-14 дней микроскопически можно определить количество колоний, а зная количество
посеянных клеток на агар и количество колоний, можно определить содержание этих клеток
Тест образования колоний in vitro. Культивирование клеток к.м. в полужидкой среде, содержащей
агар. Используется чаще для исследования факторов, регулирующих гранулоцитопоэз.
Авторадиография отдельных клеток.
Лазерная конфокальная микроскопия
Проточная цитофлуориметрия: иммунофенотипирование, клеточный цикл
Внутриклеточное определение уровня цитокинов
Кариотипирование, молекулярная диагностика: FISH, ПЦР, чипы
21.09.2014
6
Confocal Imaging – Single
Plane
Non-confocal
40x objective
21.09.2014
Confocal
• Improves resolution
• Image specific cell layer
• Removes background fluorescence
• Reduces photobleaching/phototoxicity
7
Оценка состояния костного мозга
• Стернальная пункция-аспират
(нативная клеточная взвесь)
Из пунктата костного мозга готовят мазки для цитологического
исследования, во время которого оценивают
количестввенное соотношение различных типов клеток и
иих морфологию, а также проводят поиск чужеродных для
костного мозга клеток (например, метастазов
злокачественной опухоли). Микроскопия мазка костного
мозга позволяет, кроме того оценить запасы железа
(сидеробласты).
• Трепанобиопсия (остеомедуллярный
циллиндр)
При трепанобиопсии подвздошной кости получают столбик
костной ткани, содержащий кроветворную ткань. Костный
мозг декальцинируют и готовят из него срезы для
гистологического исследования. Трепанобиопсия позволяет
оценить структуру костного мозга; кроме того, это самый
надежный метод диагностики инфильтративных поражений
21.09.2014
костного мозга.
8
Оценка миелограммы
• Миелограмма: миело- + греч. gramma
запись
– выраженный в форме таблицы или диаграммы
результат микроскопии мазка пунктата костного
мозга, отражающий качественный и
количественный состав ядросодержащих
клеток миелоидной ткани.
• Подсчет миело- и мегакариоцитов в
счетной камере
• Лейко-эритроцитарный индекс
• Индекс созревания нейтрофилов
• Индекс созревания нормобластов
21.09.2014
9
Направление на
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
миелограмму
Материал: костномозговой пунктат, трепанобиоптат
(нужное подчеркнуть)
исследование первичное, повторное
(нужное подчеркнуть)
Пациент:______________________________________________________________________
(фамилия, имя, отчество разборчиво)
возраст:___________
пол: м, ж
Отделение:_______________________________врач:________________________________
(фамилия,
инициалы)
№ истории болезни:________________________дата взятия материала:_________________
Диагноз:______________________________________________________________________
Сопутствующие заболевания:____________________________________________________
Селезенка_____________печень_______________лимфоузлы_________________________
_____________________________________________________________________________
Данные полного анализа крови: Er.:____x1012/л, Hb:_____г/л,Ret:_____0/00, Tr:______x109/л
L:______ x109/л,L-формула:_______________________________________СОЭ______мм/ч
Анализ от:__________ сделан ____________________________________________________
(дата)
(наименование лечебного учреждения, сделавшего
анализ, с указанием населенного пункта)
Дополнительно_________________________________________________________________________
____________________________________________________________________
Материал доставляется в 406 каб. (стационар, 4-й этаж)
Препараты должны быть подписаны (фамилия пациента), направление полностью заполнено,
в противном случае материал в обработку не принимается!
21.09.2014
10
ИРКУТСКАЯ ОРДЕНА «ЗНАК ПОЧЕТА» ОБЛАСТНАЯ КЛИНИЧЕСКАЯ БОЛЬНИЦА
ЦЕНТР ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
ИССЛЕДОВАНИЕ КОСТНОМОЗГОВОГО ПУНКТАТА
Пациент: Кетмиров А.В.
Отделение: гем
болезни: 59
Показатели миелограммы
бластные клетки
возраст: 59
врач: Ребриков А.Н.
дата взятия материала: 03 01 08
Полученный
результат
1,6
миелобласты
Пределы
нормальных
колебаний
пол: м
№ истории
Диагноз: о. лейкоз, ремиссия
Показатели миелограммы
Полученный
результат
Пределы
нормальных
колебаний
0,1-1,1
эритробласты
0,4
0,2-1,1
0,2-1,7
пронормоциты
0,2
0,1-1,2
промиелоциты
2,4
1,0-4,1
базофильные
2,0
1,4-4,6
миелоциты
20,6
7,0-12,2
полихроматофильные
17,6
8,9-16,9
метамиелоциты
5,2
8,0-15,0
оксифильные
3,6
0,8-5,6
палочкоядерные
9,8
12,8-23,7
все эритроидные элементы
23,8
14,5-26.5
сегментоядерные
19,8
13,1-24,1
Индекс созревания
эритрокариоцитов
0,9
0,7-0,9
все нейтрофильные элементы
55,4
52,7-68,9
Индекс созревания
нейтрофилов
0,87
0,5-0,9
эозинофилы (всех генераций)
4,2
0,5-5,8
3:1
2,7:1- 4.5:1
базофилы
Лейко-эритробластическое
соотношение
1,2
0-0,5
лимфоциты
9,2
4,3-13,7
моноциты
2,0
0,7-3,1
плазматические
клетки
Описание: Клеточность
0,2 пунктата в пределах
0,1-1,8 нижней границы нормы. Количество бластных клеток 1,6%.
костномозгового
Красный росток в норме, тип кроветворения нормобластический. Гранулоцитарный росток в норме. Мегакариоцитарный росток
количественно в норме, отшнуровка тромбоцитов обильная.
Заключение: Результаты исследования не противоречат выставленному диагнозу.
21.09.2014
11
Дата: 04 01 08
Врач: ГороховаЛ.А,
Нормальная миелограмма (по Соколову В.В., Грибовой И.А., 1972)
Показатели
Среднее значение, %
Пределы колебаний, %
Ретикулярные клетки
0,9
0,1-1,6
Бласты
0,6
0,1-1,1
Миелобласты
1,0
0,2-1,7
Нейтрофильные:
промиелоциты
миелоциты
метамиелоциты
палочкоядерные
сегментоядерные
2,5
9,6
11,5
18,2
18,6
1,0-4,1
6,9-12,2
8,0-14,9
12,8-23,7
13,1-24,1
Все нейтрофильные элементы
60,8
52,7-68,9
Эозинофилы всех генераций
3,2
0,5-5,8
Базофилы
0,2
0-0,5
Эритробласты
0,6
0,2-1,1
Пронормобласты
0,6
0,1-1,2
Нормобласты:
базофильные
полихроматофильные
оксифильные
3,0
12,9
3,2
1,4-4,6
8,9-16,9
0,8-5,6
Все эритроидные элементы
20,5
14,5-26,5
Моноциты
1,9
0,7-3,1
Лимфоциты
9,0
4,3-13,7
Плазматические клетки
0,9
0,1-1,8
118,4
41,6-195,2
3,3
2,1-4,5
Индекс созревания эритрокариоцитов
0,8
0,7-0,9
Костномозговой индекс нейтрофилов
0,7
0,5-0,9
Количество миелокариоцитов (в тысячах в 1
мкл)
Лейко-эритробластическое отношение
21.09.2014
12
Трепанобиопсия
• Трепанобиопсия позволяет наиболее полно оценить
строение КМ (наличие или отсутствие в нем
лимфоидной
инфильтрации,
характер
ее
распределения в КМ и, в частности, расположение
лимфоидного инфильтрата по отношению к балкам
пластинчатой кости), а также состояние гемопоэза в
целом, соотношение жировой и кроветворной тканей,
клеточность последней, дать характеристику стромы
КМ и костных балок, в частности, распределение и
степень
выраженности
ретикулиновых
и
коллагеновых волокон, активность остеобластов и
остеокластов, ширину межбалочных полостей и т.д.
• Основными
показаниями
к
проведению
трепанобиопсии КМ являются:
• подозрение на лимфому;
• установление гистотипа лимфомы;
• определение стадии опухолевого поражения на всех
этапах лечебно-диагностического процесса;
• контроль результатов лечения с целью выявления
ремиссии, частичной ремиссии, рецидива опухоли и 13
21.09.2014
т.д.
Трепанобиопсия
21.09.2014
14
Трепанобиопсия
СD 20+
• Интерстициальный
• Паратрабекулярный
• Очаговый
(лимфома клеток маргинальной зоны)
• Интрасинусоидальны
й21.09.2014
15
Теория кроветворения
• Базируется
на
унитарной
теории
А.А.Максимова (1918), согласно которой
все клетки крови происходят из единой
родоначальной клетки, напоминающей
лимфоцит
• Клетки,
способные
восстанавливать
гемопоэз после облучения или токсических
воздействий, носят название «стволовых
клеток»
• Нормальное
кроветворение
поликлонально.
Размер
клона
0,5-1
млн.зрелых клеток
• Продолжительность жизни клона не
превышает 1 месяц (90%), редко клон
функционирует полгода (10%)
• Замена клонов объясняется истощением
пролиферативного потенциала СКК (5016
21.09.2014
делений)
Ростовые
факторы в
кроветворении
21.09.2014
17
Цитокины
• Цитокины (от греч. кytos-клетка kines-движение) –
обширная
группа
(более
100
молекул)
гормоноподобных медиаторов белковой природы,
большинство из которых продуцируется клетками
иммунной системы по ходу иммунологических и
воспалительных реакций (А.Н.Маянский, 2005).
• К
продукции
цитокинов
способны
все
разновидности лейкоцитов, тромбоциты, тучные и
эпителиальные
клетки,
эндотелиоциты,
дендритные клетки, фибробласты, клетки нервной
ткани, соматические клетки.
• Приоритетные
продуценты
цитокинов
–
активированные макрофаги и Т-хелперы (CD
4+лимфоциты)
• Действие
цитокинов
носит
межсистемный
характер, регулируя гармонию организма в целом
21.09.2014
18
Классификации цитокинов
• Факторы регуляции гемопоэза
• Провоспалительные и
противовоспалительные
• Проапоптотические и
антиапоптотические
• Функциональная классификация
:хемокины, эффекторные
• По имени клетокпродуцентов:монокины, лимфокины,
нейтрофилокины
21.09.2014
19
Свойства цитокинов
Большинство полипептидных факторов
роста действует одновременно по
паракринному и аутокринному механизму .
Однако отдельные факторы, такие как
инсулиноподобные факторы роста ,
способны оказывать эндокринное действие
аутокринно
паракринно
(Помимо этого, существует еще один способ
действия факторов роста, который получил
название интракринного
телекринно
Эфффекты телекринного (системного) типа
проявляются у ограниченного числа
цитокинов и обычно сопутствуют
нарушениям гомеостаза
варианты проявления биологического действия цитокинов
21.09.2014
20
(А.Н.Маянский,2005).
Семейства сигнальных цитокинов
Факторы роста
• Семейство тромбоцитарных факторов роста (PDGF) : PDGF A, PDGF B, VEGF, PLGF,
CSF-1 SCF-стабильный фактор;
• Семейство факторов роста фибробластов (FGF) : α FGF, βFGF, int-2, K-FGF, FGF-5, GFG6, KGF,FGF-8, FGF-9;
• Cемейство инсулинов: инсулин, инсулиноподобный фактор роста IGF-1, IGF-2;
• Семейство эпидермальных факторов роста (EGF)
• Фактор роста опухолей α
• Семейство факторов роста нервов NGF NGF, BDNF, NT-3,4,5,
• Семейство факторов роста гепатоцитов HGF
Интерфероны
• Интерферон α
• Интерферон β
• Интерферон γ
Интерлейкины
• Интерлейкин 1-27
Факторы некроза опухолей
• TNFα,
•
TNFβ
Колониестимулирующие факторы CSF
• Гранулоцит-колониестимулирующий фактор G-CSF,
• Моноцит-колониестимулирующий фактор M-CSF,
• Гранулоцит-моноцит-колониестимулирующий фактор GM-CSF
Трансформирующие фактор роста
• TGFβ
• 21.09.2014
BMP
21
Структурная организация
кроветворной системы
• I тотипотентные ЭСК
• II мультипотентные СКК
• III коммитированные СКК (к
дифференцировке в 2-5 гемопоэтических линий)
• IY монопотентные СКК
• Y дифференцирующиеся,
созревающие и зрелые клетки всех 8
клеточных линий
21.09.2014
22
Схема кроветворения
21.09.2014
23
Регуляция гемопоэза
• У мужчин массой 70 кг в сутки образуется
1х10 11 лейкоцитов и 2х10 11 эритроцитов,
что составляет 100 и 200 грамм
соответственно. Таким образом, за месяц
образуется 9 кг клеток, в год -100 кг, за 70
лет жизни порядка 7 тонн клеток.
• Клеточное равновесие поддерживается
основным законом клеточной кинетики: в
единицу времени рождается и умирает
одно и то же количество клеток.
21.09.2014
24
Пул СКК гетерогенен:
Примитивные мультипотентные СКК имеют фенотип:
CD 34+Thy1+
Дифференцированные СКК CD 34+Thy1+, HLA-DR+, CD 38+
0 мин
Связывание PDGF
1 мин
Активация PDGF-R. Активация фосфатидилинозитольного пути
2-4 мин
Начало раффлинга. Ускорение полимеризации актина
5-10
мин
Максимальный раффлинг. Начало сборки фокальных контактов и
стресс-фибрилл. Активация PI3K-пути
10-15
мин
Индукция
транскрипции
коллагеназы и транзина)
15-30
мин
Макимальная скорость образования фокальных контактов и стрессфибрилл
30-60
мин
Необратимое воздействие на клетку
6ч
Индукция S-фазы
21.09.2014
24 ч
Удвоение клеток
специфических
генов
(например,
25
Время жизни клеток крови
•
•
•
•
Эритроциты 110-130 суток
Тромбоциты -10 суток
Нейтрофилы менее 10 часов
Лимфоциты способны к клональной
пролиферации –длительное выживание,
образование клеток памяти или апоптоз
• Моноциты – длительное выживание
• Производство зрелых клеток может быть
увеличено в течении нескольких часов в
10-12 раз под действие гемопоэтических
факторов роста
21.09.2014
26
Позитивные и негативные
регуляторы гемопоэза
• СКК
стромозависимы,
воспринимают
короткодистантные
стимулы,
по
мере
дифференцировки
дальнедействующие
гуморальные факторы (цитокины)
• Независимая (от запросов организма) фаза:
стимулирующие ФСК, Г-КСФ, ИЛ-6, ИЛ-7, ИЛ-11,
ИЛ-12; ингибиторные MIP-1α, TGF-β, TNF-α, кислые
изоферритины и др.)
• Линейно - неспецифические : ИЛ-3, ИЛ-4, ГМ-КСФ
• Линейно
специфические:
эритропоэтин,
тромбопоэтин, КСФ (Г-КСФ, М-КСФ, ГМ-КСФ), ИЛ-5
(эозинофилы)
21.09.2014
27
Свойства факторов роста
• Факторами роста называют группу белковых молекул,
индуцирующих синтез ДНК в клетке ( Goustin A.S. ea, 1986 ).
• Позднее было обнаружено, что спектр воздействий на
клетки этих компонентов гораздо шире, чем предполагалось
вначале. Так, некоторые белки этой группы в зависимости
от типа клеток- респондентов могут индуцировать
дифференцировку и подавлять пролиферацию .
• Кроме того, к ним относят регуляторные полипептиды,
модулирующие подвижность клеток , хемокины, но не
обязательно влияющие на деление клеток ( Stoker M. and
Gherardi E., 1987 ).
• Главное отличие факторов роста от белковых гормонов аутокринный механизм действия или паракринный
механизм действия ( холокринный механизм действия для
гормонов ; Deuel T.F., 1987 ).
• Ростовые факторы предотвращают апоптоз клеток крови
21.09.2014
28
Рецепторы факторов роста
• Рецепторы факторов роста обычно стимулируют
клеточный рост, однако при определенных условиях
они могут подавлять
клеточный рост
или
регулировать основные функции клеток.
• Большинство рецепторов факторов роста являются
рецепторными тирозинкиназами (receptor proteintyrosin kinases)
• Pецепторные тирозинкиназы являются рецепторами
клеточной мембраны, активирующими тримерные Gбелки, которые затем активируют эффекторные
молекулы
(аденилатциклазу,
фосфолипазу
С,
протеинкиназу С и др.)
21.09.2014
29
Костный мозг
• Костный мозг. Представлен клеточными островками,
образующими своеобразные структуры, представляющие
собой группы кроветворных клеток, которые лежат в сети
отростков ретикулярных клеток, адвентициальных клеток
синусов костного мозга.
Микроокружение (строма костного мозга).
• К клеткам микроокружения относятся: эндотелиальные,
адвентициальные, ретикулярные (фибробласты к.м.),
макрофаги, жировые клетки, остеокласты, остеобласты,
остеоциты.
• Внеклеточный матрикс: глюкозаминогликаны,
протеогликаны, фибронектин, ламинин, коллагеновые,
эластиновые волокна в сети которых располагаются тяжи
кроветворных
клеток и основное вещество кости.
21.09.2014
30
Возрастные особенности
кроветворения.
• Кроветворные
органы:
к.м.,
вилочковая
железа, селезенка, лимфоузлы.
• Возрастные особенности кроветворения. В
закладках лимфоузлов на 2 мес. внутриутробного
развития
имеет место
универсальное
кроветворение, затем исчезающее. Собственно
лимфопоэз начинается на 11-й неделе, нарастая
во 2-й половине беременности. Структура
селезенки
и
лимфоузлов
продолжает
формироваться до 10-12 лет.
• Красный костный мозг в трубчатых костях с 4
лет начинает замещаться на жировой, что
21.09.2014
происходит к 25-летнему возрасту.
31
Эритропоэз
• Эритрон-система, объединяющая
самые ранние предшественники
эритропоэза
• БОЕ-э гетерогенна, по мере
созревания становится
чувствительной к ЭПО, максимум у
КОЕ-Э, в проэритробластах и
базофильных эритробластах
• Фенотип КОЕ –Э: CD 34+, CD 71+
(рецептор к трансферрину), CD33+,
21.09.2014
Glycophorin A
32
Эритропоэз
• Нормальный тип эритропоэза
• Терминальный тип эритропоэза
• Неэффективный эритропоэз
21.09.2014
33
«Перескок деления»
• Пролиферируют проэритробласты (Hb),
базофильные и полихроматофильные
нормобласты до 3-7 делений
• Число делений может сокращаться при
запросе организма - «перескок
деления»
• Со стадии проэритробласта до зрелого
эритроцита клетка в норме
дифференцируется 9-14 дней
21.09.2014
34
Неэффективный эритропоэз
• Полихроматофильные эритробласты – последняя
клетка, способная к делению. 5-10%
эритрокариоцитов достигают концентрацию Hb 27 пг
на стации базофильного эритробласта, что приводит
к блокаде митоза.
• Эти клетки образуют мегалоциты с укроченным
сроком жизни (апоптоз).
• Для оценки величины неэффективного эритропоэза
(апоптоза) используют определение количества PAS
–положительных эритрокариоцитов. В норме это 38% клеток к.м.
• При дефиците В12 или фолиевой кислоты удельный
вес неэффективного эритропоэза увеличивается,
красный росток становится мегалобластическим
21.09.2014
35
Ретикулоциты
• Незрелые эритроциты, содержащие остатки РНК и
образующиеся после потери нормобластами ядер
• Стадия созревания после энуклеации оксифильного
эритробласта перед зрелым эритроцитом называется
ретикулоцитом
• Количество RET отражает скорость продукции Er в
костном мозге
• Визуальный подсчет ретикулоцитов дает
погрешность CV=25-50%
• Продукция ретикулоцитов в костном мозге составляет 3х10 9
клеток в сутки
• Ретикулоциты созревают в костном мозге 36-44 часа
• Ретикулоциты дозревают в периферической крови 24-30
часов до эритроцитов.
• В норме содержание ретикулоцитов в п.к.
0,2-1,2%
21.09.2014
36
I-II класс
геманализаторов
Sysmex SF-3000
RBC # , %;
Hb; Ht; MCH;
MCHC; MRV;
RDV-CV; RDV-SD;
Сell-Dyn Sapfire
III класс – проточная
цитофлуориметрия
RBC # , % + Hypo%; MSRV;
FRC (RBC-F),
+ Retic #, %; MCVr; RFI; LFR #,%;
MFR #,%; HFR #,%; IFR
21.09.2014
37
Определение степени зрелости
ретикулоцитов на геманализаторе
• Immature Reticulocyte Fraction (IRF) =
MFR + HFR= 2-14%
RBC
эритроциты
21.09.2014
LFT
MFR HFR
ретикутоциты
тромбоциты
38
Эритроциты
• У взрослого человека число цируклирующих
эритроцитов составляет 25-30х1012 клеток (около 2
кг)
• Диаметр эритроцита 7.2-7.5 мкм, площадь
поверхности 140 мкм 2, обьем 90 фл.
• Поверхность имеет отрицательный заряд
• В течение жизни обьем эритроцита уменьшается
за счет микровезикуляции мембран, слущивания
микровезикул
• Патологическая микровезикуляци приводит к
появлению эхиноцитов
• Старые эритроциты поглощаются макрофагами
селезенки, печени, костного мозга
21.09.2014
39
Гранулоцитопоэз
• Из КОЕ-ГМ и КОЕ-г образуются
пул
миелобластов, промиелоцитов, миелоцитов.
• Созревающие
гранулоциты-метамиелоциты,
палочкоядерные,
сегментоядерные
гранулоциты: уменьшается ядро, сегментируется исчезают
ядрышки, появляется
цитоплазма
специфическая
зернистость,
увеличивается
• Время созревания гранулоцита из миелобласта
10-13 дней
• Фенотип:
- Ранние миелоидные маркеры CD33+CD117+
CD13+MPO+
- - зрелоклеточные CD 45+, CD10+, CD11c+,
CD13+, CD15+, CD16+, CD18+, CD32+, СD33+,
CD50+, CD65+, CD117+, лактоферрин
21.09.2014
40
Гранулогенез
• Первичные гранулы окрашиваются азуром,
содержат
МПО,
лизоцим,
катепсин,
эластазу.
• Вторичные
гранулы
(специфическая
зернистость) , содержат лактоферрин,
кателицидин, В12-связывающий белок,
лизоцим, коллагеназу и др.
• Третичные гранулы содержат желатиназу,
являющуюся маркером «периферических»
гранулоцитов
• Четвертый тип гранул – секреторные
пузырьки, фосфасомы содержащие ЩФ,
тетранектин, β2-микроглобулин
21.09.2014
41
Функции нейтрофила
• Фагоцитоз. Клетка-мусорщик (Tоll-like-R 1-10 ), связывание c TLR
инициирует
активацию
NFκB,
инициирующего
синтез
провоспалительных цитокинов и других антимикробных продуктов
• Пул циркулирующих нейтрофилов составляет 8.8х109/кг. В крови
содержится не более 3% нейтрофилов, остальные- в тканевых депо и
на слизистых оболочках
• В процессе старения нейтрофилы становятся «маргинальными»,
прилипают к сосудистому эндотелию, мигрируют в ткани, где погибают
путем апоптоза
• В случае повреждения тканей, быстро мигрируют по градиенту
хемотаксического
агента.
Наибольшее
число
нейтрофилов
депонируется в сосудах легких. ОРДС.
• Хемотаксинами являются ЛПС микробной стенки, хемокины:ИЛ-8, С5а,
продукты расщепления экстрацеллюлярного матрикса и фосфолипидыЛТВ4, ПГ Е, ФАТ
21.09.2014
42
Локализация и основные
лиганды TLR
Флагеллин
ЛПС
+
Gram бактерии
Флагеллин
-
Gram бактерии
зимозан
Мурамилдипептид
TLR 7/8
NOD1 NOD2
TLR 9
?
TLR 10
TLR3
Уропатогенные
бактерии
Профилин-подобный
белок
TLR 11
Двуцепочечная РНК
TLR 6
TLR 2
TLR 5
TLR 4
TLR 2
TLR 5
TLR 6
TLR 4
TLR 1
TLR 2
TLR 6
Липопротеины
Mycoplazma spp
TLR 2
бактериальные
липопротеины
CD14
пептидогликан
ОДН CpG
Одноцепочечная РНК
21.09.2014
43
ЛПС,
Пептидогликан,
Зимозан,Флагеллин
dsRNA,sRNA,
ODN CpG и др.
HSP70, HSP60, gp96
Гиалуронат
ммЛПНП
Гепаран сульфат
Фибриноген
TIR
TRIF MyD88
IRF5
IRF3
NF-B
AP1
Выработка провоспалительных цитокинов
Выработка хемокинов
Выработка катионных противомикробных пептидов
Повышение экспрессии костимулирующих молекул (CD80/86 и др)
Активация адаптивного иммунитета
21.09.2014
44
Роль TLR в активации клеток врожденного
иммунитета при остром инфаркте миокарда
Эндогенные лиганды:
мм-ЛПНП
HSP60, HSP70
домен А фибронектина
Экзогенные лиганды:
ЛПС (Gram- бактерии)
TLR2,4
Фагоцитоз
ИФ-γ
Тh1
Презентация
антигена
Th0
АПК
Костимуляторные
молекулы
Провоспалительные
цитокины
ФНОα , ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8,
ИЛ-12,
ИЛ-15 и др.
21.09.2014
Активация
клеток МЦ/МФ
звена.
Развитие системной
воспалительной реакции
Неблагоприятный исход ОИМ:
- развитие сердечной
недостаточности, повторных
инфарктов, формирование
аневризмы
45
Эозинофилы
•Ростовым фактором для эозинофилов является
ИЛ-5
•Созревают 4 суток в костном мозге
•Циркулируют 6-12 часов, мигрируют в ткани, где
погибают через 12 суток
•Гранулы эозинофила содержат БОП, КФ,
арилсульфатазу,
коллагеназу,
эластазу,
пероксидазу и др.
•Имеет Fc и С3-рецепторы
•Продуцирует ИЛ-3, ФНО, ИЛ-4, ИЛ-5, γ-ИФ
21.09.2014
46
Базофилы и тучные клетки
• Базофилы дифференцируются в костном мозге
1.5-5 суток под действием ИЛ-3, ИЛ-4, ГМ-КСФ
• Период полужизни базофила 6 часов, мигрируя в
ткани погибает через 1-2 суток
• Гранулы содержат гистамин, гистидин,гепарин,
серотонин, хондроитинсульфатазы, Т, ХТ, ФАТ,
ЛТ, Тх, ПГ, ФХЭ, ФХН.
• ТК заселяют эпителий, подслизистый слой ЖКТ,
дыхательной системы, урогенитального тракта,
кожу, серозные оболочки.
• Тучные клетки способны к делению и являются
долгожителями (месяцы, годы).
• Имеют Fcγ-рецепторы, Fc ε-рецепторы к IgE, на
которых комплекс аг+ат сохраняется до года
• ТК учатвуют в образовании межклеточного
21.09.2014
вещества,
путем синтеза гликозаминогликанов 47
Моноцитопоэз
• Клетки диаметром 15-20 мкм, с крупным бобовидным
ядром, содержащим 1-2 нуклеолы, голубой или
«дымчатой»
цитоплазмой,
пылевидными
азурофильными гранулами.
• Образуются из КОЕ-ГМ
КОЕ-М под действием ГМКСФ, М-КСФ, ИЛ-3
• Дифференцировка
моноцита
из
монобласта
происходит в течение 5 дней, после чего они сразу
выходят в кровоток, не создавая костномозгового
резерва
• В крови делятся на 2 пула: циркулирующий (18х106
клеток/кг) и пристеночный (63х106)
• Моноциты циркулируют в крови от 1.5 до 5 суток
• Тканевый пул СМФ
в 25 раз превышает их
содержание
в крови: в печени 50%, легких и селезенке 48
21.09.2014
по 15%, , брюшной полости 8%, остальные в ЦНС и
Дендритные клетки
• Разновидности:
фолликулярные,
интердигитирующие ДК, вуалевидные, Клетки
Лангерганса
• Клетки Лангерганса составляют 2% всех
эпидермальных клеток, продолжительность жизни
3 недели.
• Клетки Лангерганса мигрируют в лимфоузел и
становятся интердигитирующими ДК
• Клетки Лангерганса имеют маркеры: белок S-100,
гранулы Бирбека.
21.09.2014
49
Макрофаги и ДК как АПК
21.09.2014
50
МФ в ИО: Тх1 и Тх2
21.09.2014
51
Фенотип моноцитов/макрофагов
• CD11c, CD 11b, CD14, CD13, CD16,
CD32, CD 64, CD31, CD33, CD35,
CD36, HLA-DR, CD 161
Antigen
Fc region
C1r
C1s
C1q
C1
Antibody
Клетка-мишень
H20/
Ions
Lysis
21.09.2014
Pores
(8-18 C9s)
52
Тромбоциты
•
•
•
•
Формируются из КОЕ-мгкц колонии
мегакариоцитарных клеточных элементов
Безъядерная сферическая клетка диаметром 2-4
мкм, популяция клеток неоднородна, встречаются
зрелые, юные, старые, раздраженные формы
При созревании клетки проходят три
морфолигически идентифицируемые стадии:
мегакриобласт (10%)
промегакариоцит (15%)
мегакариоцит (75%)
Избыток тромбоцитов тормозит тромбоцитопоэз
21.09.2014
53
Схема регуляции
мегакариоцитопоэза
2n
2n
Пролиферация МКЦ
предшественников
ФСК,
ЛИФ
21.09.2014
2n
4n
эндомитоз
Дифференцировка МКЦ
предшественников
8-32 n
Продукция
тромбоцитов
ИЛ-1, ИЛ-3, ИЛ-4, ИЛ-6,ИЛ-11,
ФСК, ЛИФ, ГМ-КСФ, Г-КСФ,
ТПО
54
Тромбоцитопоэз
• Симуляторы тромбоцитопоэза: ИЛ-1, ИЛ-3,
ИЛ-4, ИЛ-6,ИЛ-11, ФСК, ЛИФ, ГМ-КСФ, Г-КСФ,
эритропоэтин, тромбопоэтин
• Ингибиторы тромбоцитопоэза:
тромбоцитарный фактор 4, ТФРβ, α-ИФ, γ-ИФ
и др.
• Период созревания 8 дней,
продолжительность пребывания в кровотоке
9-11 дней
• Маркеры клеток мегакариоцитарного ростка
:CD 41, CD 61
21.09.2014
55
Строение тромбоцитов
• Наружная поверхность тромбоцита покрыта гликокаликсом
• Цитоплазматическая мембрана
образует «открытую
канальцевую систему» (ОКС)
• Под мембраной расположены плотные микротрубочки –
место депонирования Са и синтеза ПГ
• В состав наружного слоя фосфолипидной мембраны
тромбоцита входят
не обладающие прокоагулянтной
активностью – фосфатидилхолин и сфингомиелин
• В процессе активации тромбоцита «наружу» перемещаются
фосфолипиды
с
прокоагулянтной
активностью:
фосфатидилсерин,
фосфатидилэтаноламин,
фосфатидилинозитол
21.09.2014
56
Рецепторы тромбоцитов
Мембранные
рецепторы
Лиганды
Число
рецепторов на 1
тромбоците
Рецепторы
для
высокомоле
кулярных
белков
Фактор Виллебранда, тромбин
50 000
Фибриноген, фактор Виллебранда,
фибрин, фибронектин, витронектин,
тромбосподин
50 000
Фибронектин, ламинин
1000
Витронектин, тромбосподин
100
Тромбосподин
1000
Коллаген
Рецепторы
для
физиологич
еских
стимуляторо
в 21.09.2014
АДФ
600-60
000
Серотонин
300
Гистамин
50
Вызопрессин
Тромбин, тромбоксан
57
1000-2000
Источники стволовых гемопоэтических клеток
Стволовые клетки
периферической крови
(СКПК)
Костный мозг
(КМ)
Пуповинная кровь
(ПК)
21.09.2014
58
21.09.2014
59
Литература
• С.А,Луговская, В.Т, Морозова, М.Е,Почтарь, В.В.
Долгов Лабораторная гематология.-М.,2006, 226 с.
• С.А, Луговская, М.Е. Почтарь, Н.Н.Тупицын
Иммунофенотипирование в диагностике
гемобластозов.-М, 2005.-166 с.
• И.И.Долгушин, О.В.Бухарин Нейтрофилы и
гомеостаз. Екатеринбург, УО РАН: 2001, 280 с.
• А.Рабсон.А.Ройт, П.Делвз Основы медицинской
иммунологии, М, «Мир», 2006.-320 с.
• А.Н. Маянский Лекции по иммунологии.Н.Новгород, НГМА,2005.-270 с.
21.09.2014
60
Документ
Категория
Презентации по химии
Просмотров
293
Размер файла
7 828 Кб
Теги
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа