close

Вход

Забыли?

вход по аккаунту

?

Презентация

код для вставкиСкачать
Департамент здравоохранения города Москвы
МОСКОВСКИЙ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЙ ЦЕНТР НАРКОЛОГИИ
ДИАГНОСТИКА ЗАБОЛЕВАНИЙ
ЗАВИСИМОСТИ НА ОСНОВЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ
АНТИТЕЛ К НЕЙРОПЕПТИДАМ И
БИОГЕННЫМ АМИНАМ
Мягкова Марина Александровна
Д.б.н., профессор
Главный научный сотрудник
Отдела экспериментальной биохимии и иммунологии
Болезни зависимости
- нейроиммунопатологии, объединенные
общими признаками и механизмом развития.
Наркотическая,
зависимость
от ПАВ
Алкоголизм
Зависимость
от азартных игр
Пищевая
зависимость
… и другие виды
Клиническая динамика
состояний зависимости
Синдром зависимости
Патологическое
влечение
Абстинентный
синдром
Вегетативные,
психические,
соматические нарушения
Концепция нейроэндокриноиммунных
взаимодействий
Нервная
система
гипофиз
передняя
доля
задняя
аденодоля
гипофиз
Иммунная
система
тимус
периферические
эндокринные
железы
регулярторные факторы
Эндокринная
система
Участие нейротрансмитерных систем
в развитии патологии синдрома
зависимости:
γ-аминомасляная кислота (ГАМК)
5-гидрокситриптамин (серотонин - СТ)
дофамин (ДА)
норадреналин (НА)
β–эндорфин (β-Энд)
Подходы к диагностике состояний
зависимости
1. Определение генетической предрасположенности:
Ген алкоголдегидрогеназы ADH4:
Ген холинергического мускаринового рецептора CHRM2
Ген молекулы клеточной адгезии NrCAM:
Ген рецептора серотонина HTR2B
2. Оценка психоэмоционального состояния
с помощью вкусового теста (по СТ и НА):
Tom P. Heath, Jan K. Melichar, David J. Nutt, and Lucy F. Donaldson
Human Taste Thresholds Are Modulated by Serotonin and Noradrenaline
J. Neurosci., Dec 2006; 26: 12664 – 12671.
3. Оценка состояния здоровья на основе определения
показателей гуморального иммунитета.
Функции иммунной системы
1896 г. Мечников И.И.:
Система фагоцитов предназначена не столько для борьбы с патогенными
микроорганизмами, сколько для поддержания «состояния гармонии» или
состояния здоровья в условиях постоянного давления Среды.
Содержание антител в сыворотке крови: до 20 г Ig
Содержание IgG: 10 - 14 г
Ежедневный ресинтез IgG: 10 г
Антитела к чужеродным агентам: 70 %
Естественные ауто-Ат:
30 %
Антиидиотипические Ат: Ат к рецепторам
Естественные антитела –
нормальный физиологический
компонент организма
ОСНОВНЫЕ
ХАРАКТЕРИСТИКИ
Существуют в кровотоке доноров в норме
без антигенной стимуляции
Связываются с эндогенными
биорегуляторами и участвуют в регуляции
гомеостаза
Являются низкоаффинными и
полиспецифичными иммуноглобулинами
Существуют в связанной форме в виде
иммунных комплексов
В их биосинтезе участвуют
немутированные эмбриональные гены
Выполняют регуляторную и транспортную
функцию
ОСНОВНЫЕ
ФУНКЦИИ
Первичная защита от инфекций
Очищение от стареющих клеток
Антигенная презентация Тклеткам
Противоопухолевый контроль
Противовоспалительная
активность
Селекция иммунного репертуара
и гомеостаз аутореактивности
Наши исследования показали:
е-АТ существуют в норме в сыворотке крови человека
е-АТ обладают низким аффинитетом (Ка 105 – 107 M-1) и
полиспецифичны
Свойства е-АТ коррелируют с клиническим диагнозом и
течением заболевания
Репертуары иммунореактивности и уровень е-АТ в
сыворотке крови изменяются при патологии
Свойства е-АТ могут быть использованы для ранней
диагностики заболеваний
созданы новые методы выявления е-АТ к эндогенным
низкомолекулярным соединениям с различной структурой и
физиологическими функциями;
разработаны новые методы диагностики различных типов
заболеваний
Определение Ка для антител, выделенных из
сыворотки крови доноров и больных.
Исследуемый
антиген
Диапазон Ка, М-1
Группа больных
Группа доноров
IgG
IgM
IgG
IgM
β-эндорфин
106-107
107-1010
103-104
103-104
дерморфин
108-1010
105-108
104-105
-
серотонин
107-1010
105-108
103-104
103-104
гистамин
107-109
107-1010
104-105
103-104
дофамин
107-1010
105-108
103-104
103-104
Схема синтеза коньюгата антигена с
полимерной матрицей
O=C-NHR
NO2
O=C-O
n
+ H2N
Антиген
(R)
O=C-NHR
NO2
O=C-O
1
2
3
Степень
модификации
100%
50%
10-15%
0,8
донор 1
0,7
0,7
донор 2
0,6
0,6
донор 3
0,5
0,5
донор 4
0,4
пациент 1
0,3
пациент 2
0,2
пациент 3
0,2
0,1
пациент 4
0,1
OD492
OD492
Выбор оптимальных условий для твердофазного ИФА
0,4
0,3
0
0
100
200
400
800
1600
3200
0
Разведение сыворотки
Антиген
Орфанин
TYR-W-MIF-1
Концентрация конъюгата, мкг/мл
0,5 – 5
1-2
1
2
3
4
5
донор 1
донор 2
донор 3
донор 4
донор 5
донор 6
пациент 1
пациент 2
пациент 3
пациент 4
пациент 5
пациент 6
концентрация, мкг/мл
Разведение антисыворотки
1:100 – 1:800
1:100 – 1:400
Схема твердофазного ИФА для определения
антител к низкомолекулярным соединениям
Сорбция
Добавление
образца
Aг
Aг
Aг
Добавление вторичных
антител для детекции
иммунного комплекса
Aг
+
Aг
+
Aг
Конъюгат антигена, иммобилизованный
на твердой фазе
Aг
Антитела, специфичные к антигену
E
Вторичные антитела,
меченные ферментом
E
Aг
E
Aг
E
Aг
E
Регистрация
ферментативной реакции
Иммуноферментные тест-системы для определения
естественных антител к низкомолекулярным
эндогенным биорегуляторам
ФАКТОРЫ СИСТЕМЫ
СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ
КАТЕХОЛАМИНЫ
Дофамин
Норадреналин
Адреналин
Тромбин
Антитромбин III
2-макроглобулин
ОПИОИДНАЯ СИСТЕМА
БИОГЕННЫЕ АМИНЫ
Серотонин
Гистамин
-эндорфины
Энкефалины
Дерморфин
ПЕПТИДЫ РЕНИНАНГИОТЕНЗИНОВОЙ
СИСТЕМЫ
Брадикинин
Ангиотензин II
Вазопрессин
Объект исследования
Сыворотки крови пациентов:
Больные
Количество
Продолжительность
заболевания
опийной
наркоманией
алкоголизмом
45
0,5 – 5 лет
10
3 – 5 лет
игроманией
14
1 – 10 лет
доноры
50
доро
Образцы предоставлены институтом
реабилитации ННЦ наркологии Росздрава
Изменение уровня антител к биогенным аминам и
опиоидным пептидам в норме и при заболеваниях
зависимости
Результаты ИФА определения антител к серотонину, -эндорфину, дофамину в
группе больных опийной наркоманией, алкоголизмом.
Группа больных и
доноров
Значение ОD450 в ИФА в среднем по группе*
Серотонин
-эндорфин
Дофамин
Больные наркоманией
1,153 ± 0,027
0,941± 0,016
1,052± 0,019
Больные алкоголизмом
0,439 ± 0,023
0,259 ± 0,005
0,329 ± 0,037
0,670 ± 0,026
0,588 ± 0,021
0,721± 0,029
σ = 0,037
σ = 0,029
σ = 0,053
Доноры
* p < 0,01 (в сравнении с донорами)
Нейробиологическая основа развития игровой
зависимости:
G. Meyera, J. Schwertfegerb, M.S. Extonb, O.E. Janssenc, W. Knappd, M.A.
Stadlera, M. Schedlowskie, T.H.C. KruЁgerf. Neuroendocrine response to casino
gambling in problem gamblers. Psychoneuroendocrinology (2004) 29, 1272–1280
Результаты ИФА антител к эндогенным биорегуляторам
у больных игроманией
Исследуемый
антиген
Средние по группе значения ОD450 в ИФА*
Больные игроманией
Доноры
Выше нормы
Ниже нормы
ОD450
Кол-во
OD450
Кол-во
чел.
чел.
Ангиотензин ll 0,92±0,12
0,55±0,09
12
-эндорфин
Дофамин
Серотонин
Гистамин
0,80±0,06
0,82±0,09
1,06±0,12
4
4
12
0,23±0,02
-
* p < 0,01 (в сравнении с донорами)
10
-
0,45±0,06
0,52±0,04
0,55±0,07
0,74±0,08
Сравнительные результаты ИФА антител к β-эндорфину,
дофамину, серотонину и определения уровня
реабилитационного потенциала в группе больных игроманией
Больные
игроманией
(14 человек)
Группа 1
(4человека)
Группа ll
(10 человек)
Диапазон Уровень е-Ат Уровень е-Ат Уровень ек
к Ат к
УРП
серотонину
эндорфину
дофамину
146 - 135
Повышен
Норма
Повышен
67 - 78
Норма
Понижен
Норма
поставление результатов
ИФА
с уровнем
реабилитационного
потенциала (УРП)
160
120
У
Р
П
80
40
0
высокий УРП
средний УРП
Группа I
Группа II
Уровень е-Ат к эндогенным
биорегуляторам в динамике лечения
наркомании, алкоголизма, игромании
Обследованы больные:
наркоманией – 16 чел.
алкоголизмом – 10 чел.
Уровень е-Ат к β-эндорфину
OD492
1,6
алкоголики
наркоманы
1,4
1,2
1
0,8
норма
0,6
0,4
0,2
0
0,5
11
1,5
2
3
2,5
день
день
3
7
3,5
4
21
4,5
Уровень е-Ат к дофамину
алкоголики
наркоманы
1,4
1,2
1
0,8
норма
0,6
0,4
0,2
0
0,5
1
1,5
3
2,5
день
7
3,5
21
4,5
Уровень е-Ат к серотонину
алкоголики
наркоманы
1,6
1,4
1,2
OD492
OD492
1,6
1
0,8
норма
0,6
0,4
0,2
0
0,5
1
1,5
3
2,5
день
7
3,5
21
4,5
Тенденция изменения уровня антител к специфическому
антигену у пациентов, употребляющих опиаты
Определение антител к биогенным аминам в сыворотке крови пациентов,
употребляющих опийные препараты, может быть использовано для диагностики
различных этапов наркотизации
Уровень антител к эндогенным
биорегуляторам у здоровых доноров
100
норма
повышен
80
понижен
%
60
40
20
0
ЭНД
СЕР
ДОФ
ГИС
ОРФ
АНГ
Иммунохимическая диагностика
заболеваний зависимости
Свойства е-АТ коррелируют с клиническим диагнозом и могут быть
использованы для ранней диагностики заболеваний
•созданы новые иммуноферментные методы выявления е-АТ к эндогенны
низкомолекулярным соединениям с различной структурой и
физиологическими функциями
«Адимустат»:
новый метод диагностики различных типов заболеваний зависимости
Е-Ат к:
β-эндорфину
серотонину
дофамину
орфанину
ангиотензину
гистамину
Диагностические наборы
АДИМУСТАТ
Выявление антител к эндогенным биорегуляторам в
сыворотке крови:
Антиген
β-эндорфин
Серотонин
дофамин
гистамин
орфанин
ангиотензин
Диагностические наборы
АДИМУСТАТ
Оформлены все нормативные
документы в МЗСР России
Получены 2 российских патента
Зарегистрирована торговая марка
продукта
Выявление социобиологических
факторов риска
Оценка психоэмоционального состояния:
консультация психолога
Анкетирование
Тестирование на приборе
(полиграф)
Генетическое
тестирование
Диагностика
«Адимустат»
Заключение врача-психолога
Сферы применения
Метод «Адимустат» позволяет выявлять антитела к эндогенным
биорегуляторам в сыворотке крови человека с помощью
твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА).
Метод может быть использован в следующих
направлениях:
• для оценки развития патологии зависимости(наркомании,
алкоголизма, игромании) и определение тяжести заболевания
• для диагностики и раннего выявления патологических
изменений в организме и оценке его адаптационных
возможностей.
«Адимустат» позволяет определить
тяжесть патологической зависимости, а в
случае с наркозависимостью оценить
наркотический «стаж».
Обучение врачей-лаборантов
методам Комплексной методики
7 – 10 ноября 2011 г.
МНПЦ наркологии организует
Научно-практический семинар по применению Метода диагностики
«Дианарк» раннего выявления потребления наркотических веществ
Теоретические лекции и практический курс
обучения методам:
•
ИХА наркотических веществ в слюне
•
ИФА антител к наркотикам в крови
•
ИФА антител к эндогенным биорегуляторам
для оценки иммунного статуса и установления
факторов риска развития болезни зависимости
ВЫВОДЫ
1. При развитии болезни зависимости происходит нарушение
функционирования иммунной системы, проявляющиеся в
изменении синтеза естественных иммуноглобулинов,
связывающих нейромедиаторы опиоидной и моноаминовой
природы.
2. Обнаружены новые диагностические маркеры, отражающие
начальные стадии заболевания зависимости, а также
эффективность проводимой терапии. Они могут использоваться
в клинической практике, для ранней диагностики, контроля,
профилактики и своевременной диспансеризации.
3. Предложен новый метод ранней диагностики развития тяжелых
форм заболеваний зависимости, положенный в основу
современной медицинской технологии выбора комплексного
подхода лечения и реабилитации больных.
Программа Дианарк
Спасибо
за внимание!
www.dianark.ru
www.diamedica.ru
Документ
Категория
Презентации
Просмотров
92
Размер файла
4 600 Кб
Теги
1/--страниц
Пожаловаться на содержимое документа